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xiaoniu_e木虫 (正式写手)
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[求助]
请教液体培养基试管连续稀释法的操作
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测试药物的抗菌活性，用液体培养基试管连续稀释法测MIC。 每个试管中，接种菌液量多少合适？ 我在网上搜，涉及到具体操作的不多，有一个有操作的写的是“细菌检测培养基通常采用营养肉汤培养，将约为104-105个/mL浓度的接种菌液分装13个试管中”。 104-105个/mL是什么意思？（我是做药物合成的，对抗菌测试是外行，不太懂，菌液浓度的表示方法是这样的吗？） 不同的菌株，都用这个浓度吗？还是有区别？我打算做金葡和大肠杆菌。 这种方法有没有什么标准操作规程之类的呢？我在网上和文献里没检索到，对这个领域不熟悉，可能检索不到位吧。 希望专业人士赐教。 附一个我搜到的实验操作方法： 具体操作是：细菌检测培养基通常采用营养肉汤培养，将约为104-105个/mL浓度的接种菌液分装13个试管中，第一只试管中加入一定量的抗菌剂，并做2倍连续稀释至第12只试管，第13只试管作为生长对照，放置在37。C培养16-24hr，观察结果，无菌增殖的最高稀释管的、抗菌浓度，为最低抑菌浓度(MIC)。 试验观察一般要在12-18 时进行，如时间过长，轻度抑制的细菌可能会开始繁殖，另一 方面一些抗菌剂因时间过长作用减弱，受抑制的细菌会再次繁殖。 [ Last edited by xiaoniu_e on 2011-11-1 at 22:49 ] |
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zhang8826857(金币+4): good，看lz反馈，反馈的好可以向版主申请个epi哦^_^ 2011-11-02 15:22:28
xiaoniu_e(金币+10): 很详细！谢谢！ 再请教一下，含药的母液，是用什么配制呢？也是液体培养基？ 2011-11-02 19:24:55
zhang8826857(金币+4): good，看lz反馈，反馈的好可以向版主申请个epi哦^_^ 2011-11-02 15:22:28
xiaoniu_e(金币+10): 很详细！谢谢！ 再请教一下，含药的母液，是用什么配制呢？也是液体培养基？ 2011-11-02 19:24:55
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第一，你需要确定你的细菌溶液中含有的细菌数量，可以通过测OD值，平板计数法等来测定。 第二，每个试管中加入1~2m（如果这里加入是1ml，后面也都加入1ml）l液体培养基，编好序号为1-13. 第三，在编号1的试管中加入药液，这就根据你配制的母液和需要的浓度来加入，一般尽量是加入1~2ml的配置母液哈，然后1号管中吸取1~2ml的混合液体加入第2号试管中，依次逐个稀释至第11号管，12号管为阳性对照（不加药液，只加稀释好的菌液），13号管为阴性对照（只有培养基，其余什么都不加入）（加入你要做的浓度是256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25，那么这步加入药液后，液体中的药物浓度应该是512 256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5，是因为后面还有菌液将药液进行了2倍稀释）。 第四，加入1ml稀释好的菌液，放置培养箱中培养12-16h观察结果。 |
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