24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

虫儿7893

银虫 (小有名气)

应助: 6 (幼儿园)
金币: 512.7
散金: 75
红花: 1
帖子: 291
在线: 87小时
虫号: 651766
注册: 2008-11-11
性别: MM

[求助] 第一次做AFLP，各种茫然求指点

以前没有经验，哪步出错了也不晓得，请做过的帮忙指点：
1.酶切后电泳图片（图1）：条带大小正常吗？10000的marker

2.选择性扩增条带很弥散（图2），用1%琼脂糖胶跑电泳紫外透射观察的。这样做有什么问题？很多文献都是用银染法观察，必须这样做吗？

图1. 从左到右：酶切片段1，酶切片段2，目的基因组，10000marker

图2 从左到右：选择性扩增条带，10000marker

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

核酸与基因生物学

» 猜你喜欢

解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景已经有0人回复
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有89人回复
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析已经有1人回复
Tosylate-DPA-714介导¹⁸F-DPA-714 PET成像的前沿进展已经有0人回复
I-BRD9: BRD9溴结构域化学探针，BET选择性>700倍已经有0人回复
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner 已经有0人回复
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner 已经有0人回复
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner 已经有0人回复
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner 已经有0人回复
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂已经有0人回复

1楼 2012-08-02 16:16:21

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖置顶 ( 共有1个 )

pyz1979

铜虫 (初入文坛)

MolEPI: 1
应助: 1 (幼儿园)
金币: 133.6
帖子: 11
在线: 10小时
虫号: 1119400
注册: 2010-10-11
专业: 系统生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励积极热心应助 2012-08-07 15:42:23
虫儿7893: 金币+10, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2012-08-07 17:03:35

AFLP一般分为酶切、连接、预扩、选扩4个步骤，而且对于基因组DNA的纯度要求比较高，建议你测一下260/280比值，看看纯度如何，之后再进行实验。

至于选扩产物弥散，一个原因跟基因组DNA纯度有关，如果纯度没有问题的话，那可能跟你的引物有关，引物的选择性碱基根据文献确认，一般为G或T比较好一点，自己也可以都做一下看看结果，如果都是弥散，就可以试着再加一个碱基做一下，根据AFLP原理，选择性碱基越多，条带越少。

建议你带一个确定的基因组DNA，比如你做大肠的，就找一个大肠纯菌株DNA一起做，这样如果它能做出来，而你的样品做不出来，那实验条件没有问题，而你的样品就有问题。

至于银染法和琼脂糖电泳，由于我只做过后面一个，只能凭经验来说：能用琼脂糖分开的其实用琼脂糖就可以了。