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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于原核表达目的蛋白的问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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chicktrick

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于原核表达目的蛋白的问题 已有4人参与

各位虫友 小弟我现在做到蛋白原核表达这一步了 但是发现一个问题 在目的蛋白大小的区域 表达载体自身也有一个蛋白 请问往下怎么区分
另外 我的蛋白大小约为35kd 但是诱导之后发现在26kd出现了明显的差异 而35kd的差异并不明显 请问这可能是什么原因造成的
在下图中从左到右前八条甬道依次是iptg 0.2mmol 0.3mmol 0.4 -0.9mmol  第九条是iptg 0mmol 第十条是bl21 空白菌株 第十一条是marker  marker大小从上到下依次是 180 130 95 72 55 43 34 26 17 10

关于原核表达目的蛋白的问题
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1楼 2014-12-19 13:56:13
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-19 18:34:45
你好，你的诱导条件是什么
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踏实
2楼2014-12-19 14:30:39
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chicktrick

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hajierlove at 2014-12-19 14:30:39
你好，你的诱导条件是什么

你好 iptg梯度 37度 180rpm
赞一下 回复此楼
3楼2014-12-19 14:48:13
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chicktrick

铁虫 (初入文坛)
各位大神们啊
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4楼2014-12-20 12:05:42
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李增林

禁言 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-21 23:09:54
本帖内容被屏蔽
5楼2014-12-21 11:26:22
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灰血动物

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-22 23:02:06
你好，我的建议是更换载体，另外诱导的条件还需要进一步摸索。

因为无法从图中明显看到哪个目的条带，建议可以从添加诱导剂的时间和培养温度入手。

祝君好远~
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未完成
6楼2014-12-22 14:09:01
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灰血动物

金虫 (小有名气)
对不起 错别字了

是

祝君好运哈
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未完成
7楼2014-12-22 14:09:41
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鱼大喵

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

wesern blot验证一下不就可以了吗？要不换换载体试试
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8楼2014-12-22 16:59:05
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chicktrick

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-12-22 14:09:01
你好，我的建议是更换载体，另外诱导的条件还需要进一步摸索。

因为无法从图中明显看到哪个目的条带，建议可以从添加诱导剂的时间和培养温度入手。

祝君好远~

谢谢你 我决定先提取可溶蛋白做一个western blot试试
赞一下 回复此楼
9楼2014-12-25 22:37:33
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