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茜草科

新虫 (小有名气)

[求助] 同样条件,压力不一样,出峰时间很大差别 已有3人参与

我的流动相是A:甲醇:水(1:1)+10mm乙酸铵和0.1%的甲酸
                           B:甲醇

     前天做的时候不管是分离效果都达到了我的要求,可是同样条件怎么都重复不出来了,欲哭无泪,大家帮帮忙,用到了缓冲盐,感觉很不稳定啊,平衡也是平衡了很久,两个压力都变了很多,但整体变化是差不多的,什么原因呢?

      谢谢!!!!
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  • 2014-12-19 10:32:45, 372.25 K

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呀呀好傻

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

1.我做过就是发现保留时间很乱,发现都向前跑了,结果才发现是我的水相管道堵了,保留时间都往前移动
2.还有一次就是压力偏低,怎么做都上不去,我就做了一个流速试验,原来是流动相从我洗泵的那个管道出渗出,导致流速没有达到自己设置的1ml/min.前面是压力偏低
3.压力偏高的时候,我一般是把平时的水与甲醇梯度洗脱变成水与乙腈洗柱,乙腈就只有洗半个小时就可以把很多甲醇洗不下来的东西都洗出来
父母在人生尚有来处父母走人生只剩归途
3楼2014-12-23 14:13:58
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查看全部 7 个回答

voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
本人认为原因可能是一下几点
1.可能是你当初配置流动相的时候没有控制好比例、PH值
2.可能是你的泵泵液有问题
3.梯度差异或者是走完梯度平衡时间不够
微信公众号:Pharmaguider(药事纵横),主页:www.pharmaguider.cn
2楼2014-12-19 14:32:01
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呀呀好傻

金虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by voyager88 at 2014-12-19 14:32:01
本人认为原因可能是一下几点
1.可能是你当初配置流动相的时候没有控制好比例、PH值
2.可能是你的泵泵液有问题
3.梯度差异或者是走完梯度平衡时间不够

你好,你说的前两种我都能理解,可是第三点你可以解释清楚一点嘛,不好意思,我是今年才毕业的,很多事情还不是很了解,谢谢
父母在人生尚有来处父母走人生只剩归途
4楼2014-12-23 14:18:52
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voyager88

金虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 呀呀好傻 at 2014-12-23 14:18:52
你好,你说的前两种我都能理解,可是第三点你可以解释清楚一点嘛,不好意思,我是今年才毕业的,很多事情还不是很了解,谢谢...

如果是走梯度,你每一针走完都需要平衡柱子,如果平衡的时间不够,峰就会发生飘移,一般是提前,峰形状也会发生改变
微信公众号:Pharmaguider(药事纵横),主页:www.pharmaguider.cn
5楼2014-12-24 09:03:00
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