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| 最近我在做qPCR,对于荧光信号的收集有些不是很清楚,具体问题如下:一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。原理是什么,为什么要这样设置? |
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2楼2014-12-17 09:59:38
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【答案】应助回帖
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| 染料法的原理是SYBR Green I与dsDNA的小沟结合,从而产生荧光;延伸阶段产生dsDNA,dsDNA与SYBR Green I结合,这时SYBR Green I荧光信号大幅增加,所以在延伸阶段采集荧光信号。如果采用两步法,一般在60℃采集荧光。探针法是因为双标探针在退火阶段与靶序列结合,延伸过程中Taq DNA Polymerase将TaqMan probe酶切开,是探针的5‘端发光基团和3’淬灭基团分离,从而产生荧光。 |

4楼2014-12-17 13:42:17














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