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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于荧光定量 已有1人参与

最近我在做qPCR,对于荧光信号的收集有些不是很清楚,具体问题如下:一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。原理是什么,为什么要这样设置?
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没有人生来洒脱,都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
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cococ_可可西

金虫 (正式写手)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-17 11:31:38
SYBR Green只有和双联DNA结合以后才会发荧光,否则检测不到荧光就无法定量,延伸的时候自然就是双链形成的时候咯。。。
厚积薄发,不忘初心,督促自己培养良好的习惯,不断完善自我。
2楼2014-12-17 09:59:38
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cococ_可可西

金虫 (正式写手)

Taq的具体原理不是很了解。。。
厚积薄发,不忘初心,督促自己培养良好的习惯,不断完善自我。
3楼2014-12-17 10:01:02
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
weiyuanzheng: 金币+5, 有帮助, 谢谢,挺有帮助的 2014-12-19 16:40:47
染料法的原理是SYBR Green I与dsDNA的小沟结合,从而产生荧光;延伸阶段产生dsDNA,dsDNA与SYBR Green I结合,这时SYBR Green I荧光信号大幅增加,所以在延伸阶段采集荧光信号。如果采用两步法,一般在60℃采集荧光。探针法是因为双标探针在退火阶段与靶序列结合,延伸过程中Taq DNA Polymerase将TaqMan probe酶切开,是探针的5‘端发光基团和3’淬灭基团分离,从而产生荧光。
rainwater
4楼2014-12-17 13:42:17
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