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weiyuanzheng铜虫 (小有名气)
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| 最近我在做qPCR，对于荧光信号的收集有些不是很清楚，具体问题如下：一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。原理是什么，为什么要这样设置？ |
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2楼2014-12-17 09:59:38
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【答案】应助回帖
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| 染料法的原理是SYBR Green I与dsDNA的小沟结合，从而产生荧光；延伸阶段产生dsDNA，dsDNA与SYBR Green I结合，这时SYBR Green I荧光信号大幅增加，所以在延伸阶段采集荧光信号。如果采用两步法，一般在60℃采集荧光。探针法是因为双标探针在退火阶段与靶序列结合，延伸过程中Taq DNA Polymerase将TaqMan probe酶切开，是探针的5‘端发光基团和3’淬灭基团分离，从而产生荧光。 |
4楼2014-12-17 13:42:17
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