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新虫 (初入文坛)

[求助] Ct法实时荧光定量 PCR分析标准菌株和样品的循环数，怎么控制二者浓度在同一水平？

刚开始接触real-time pcr，参考奶粉中阪崎肠杆菌荧光定量PCR检测行业标准SN/T 1632.3-2005，准备开发益生菌动物双歧杆菌乳亚种BB12的鉴定方法，主要思路如下：
采用动物双歧杆菌乳亚种标准菌株（ATCC 27536）作为标准品，以添加BB12配方奶粉为样品，分别提取DNA，通过荧光定量PCR测定对应循环数Ct值，比较标准品与样品Ct值，结合微生物生化鉴定结果，实现双歧杆菌亚种的鉴定，参考一篇英文文献，样品与标菌的CT值基本吻合，且CT值≤27，报告检出BB12。
请给位大神指导一下，需不需要调节标菌和样品的浓度一致？是要调控菌悬液中菌落数一致，还是cDNA或者其他？具体怎么操作呢？
根据文献内容，选了一个内参基因RPL32，可是在Genbank中没找到对应的基因序列，在EMBL和DDBJ数据库中也未找到，求大神指导~~~PS：可否用内参基因来校准样品与标品的浓度差呢？
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1楼 2014-12-16 13:58:09
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