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xmnsn

金虫 (初入文坛)

[求助] 求助:关于多酚氧化酶活性测定的问题 已有1人参与

我现在在做马铃薯的护色实验,需要测定多酚氧化酶的活性。之前我做实验一直都有明显的结果,就是酶活抑制率很明显,但是最近2周用抗坏血酸做实验酶活几乎没有任何抑制效果。本来我考虑是不是抗坏血酸不能直接影响多酚氧化酶活性,但是我之前用另一个品种的马铃薯做试验,抗坏血酸抑制酶活的效果也比较明显的。我不知道是不是我实验中哪些操作不对或者是怎样,求各位大神帮我解答下。抗坏血酸也是每次新领的试剂,应该没有实效。

我的试验操作是:将护色过的新鲜样品按1:10(5g:50g)比例加蒸馏水,低温下匀浆2min,过滤,取2ml滤液、2ml ph6.84磷酸缓冲溶液(预冷)、8ml 0.2%邻苯二酚(预冷)混合均匀,于25度下保温10min,在416nm处测ppo表示相对活性。因为是在制备某一样品中的操作,所以选择的是相对活性,实验过程相对简单。

求助 啊求助!做了好几个月了,最近突然出问题,之前一直都没有问题。考虑过是不是开空调的关系,可是调整了下试验也排除了。求大神们指教啊!!!
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sugz

至尊木虫 (著名写手)

科学家

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有没有测过前后不同品种马铃薯中多酚氧化酶的活性?
对具有抑制效果的这个实验,有没有做过重复?
仰天大笑出门去,我辈岂是蓬蒿人!
2楼2014-12-16 13:43:31
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xmnsn

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sugz at 2014-12-16 13:43:31
有没有测过前后不同品种马铃薯中多酚氧化酶的活性?
对具有抑制效果的这个实验,有没有做过重复?

之前有做过另一个品种的,效果都很明显.现在换了一个品种尝试,其他抑制效果都明显,就是最近抗坏血酸不明显.这几天我又重复去做之前做过的柠檬酸抑制也没效果了,所以怀疑是我的试验操作问题,但是方法没有变化啊.
每个试验都做了平行,也做了重复试验.
3楼2014-12-16 15:06:49
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sugz

至尊木虫 (著名写手)

科学家

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xmnsn: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-12-17 09:42:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by xmnsn at 2014-12-16 15:06:49
之前有做过另一个品种的,效果都很明显.现在换了一个品种尝试,其他抑制效果都明显,就是最近抗坏血酸不明显.这几天我又重复去做之前做过的柠檬酸抑制也没效果了,所以怀疑是我的试验操作问题,但是方法没有变化啊.
每 ...

可能有两个原因吧,一是自己操作有疏忽的环节,需要仔细分析实验步骤;
二是对实验过程中有没有带进其它杂质影响实验结果。
实验方法没问题,也有平行实验,所以从操作中分析原因。
仰天大笑出门去,我辈岂是蓬蒿人!
4楼2014-12-16 15:13:48
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xmnsn

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sugz at 2014-12-16 15:13:48
可能有两个原因吧,一是自己操作有疏忽的环节,需要仔细分析实验步骤;
二是对实验过程中有没有带进其它杂质影响实验结果。
实验方法没问题,也有平行实验,所以从操作中分析原因。...

恩恩,那一般对多酚氧化酶试验或者抗坏血酸溶液有影响的因素有哪些啊?我之前考虑过是不是实验室开空调温度的影响,也排除了这个问题。然后我就搞不清楚问题出在哪里了。。。
5楼2014-12-16 15:37:26
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sugz

至尊木虫 (著名写手)

科学家

引用回帖:
5楼: Originally posted by xmnsn at 2014-12-16 15:37:26
恩恩,那一般对多酚氧化酶试验或者抗坏血酸溶液有影响的因素有哪些啊?我之前考虑过是不是实验室开空调温度的影响,也排除了这个问题。然后我就搞不清楚问题出在哪里了。。。...

影响因素:抗坏血酸液的浓度大小,理化性质,配置过程中有没有其它金属或粒子影响,都需要分析。
仰天大笑出门去,我辈岂是蓬蒿人!
6楼2014-12-17 10:12:50
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