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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 果蔬 » 多酚氧化酶测定
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num20062622

银虫 (正式写手)

[求助] 多酚氧化酶测定

我昨天测多酚氧化酶的时候发现我的所有处理测出来的数值都没有差异
并且颜色也很淡..
是那种淡黄色的...
有谁测PPO得么'?
把方法和一些问题一起谈一下..
求交流....

我的PPO测定是 3.8ml缓冲液+0.2ml酶液+1ml邻苯二酚 30°反应10min 用1ml 10%磷酸终止反应测定在525nm处的吸光度
我的样品是枣.
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1楼 2013-01-11 14:36:25
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lx11939

木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多酚氧化酶）的测定
酶液制备：取10g 去皮果肉，加0.5PVPP0.2 mol/L磷酸缓冲液（PH=6.4）中，冰浴研磨，4℃冷冻离心机12000rpm离心20min，取上清液测定酶活性。
活性测定：将0.2ml粗酶提取液加入3ml0.05moL/L（用0.2 mol/L（PH=6.4）磷酸缓冲液配成）中。反应温度为30℃，加酶液开始扫描30秒内398nm处吸收光值变化，以每分钟△OD398nm变化0.01表示一个酶活性单位（△OD398nm/0.01wt）。
PPO酶活性（0.01△OD398/g(FW)min-1）=△OD398/0.01wt
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2楼2013-01-11 15:21:01
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num20062622

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lx11939 at 2013-01-11 15:21:01
多酚氧化酶）的测定
酶液制备：取10g 去皮果肉，加0.5PVPP0.2 mol/L磷酸缓冲液（PH=6.4）中，冰浴研磨，4℃冷冻离心机12000rpm离心20min，取上清液测定酶活性。
活性测定：将0.2ml粗酶提取液加入3ml0.05moL/L（用 ...

我上面写的那个测定方法对么?
我的不知道是酶活太低了还是怎么的颜色不明显..吸光值也很小.
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3楼2013-01-11 16:30:57
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num20062622

银虫 (正式写手)
多酚氧化酶测定的时候有颜色 或者是什么标准来肉眼判断酶活性么?
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4楼2013-01-15 20:09:51
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hyc好好

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2013-01-22 07:40:42
你的酶液纯化了吗？是不是测定的时候吸光值跳动很厉害？如果是的话，你可以选定刚放进去样品时的吸光值和反应剧烈的终点吸光值之差反应活性大小，但是要记录这段时间。最后根据你的计算公式算。个人建议哦。
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关照关照。
5楼2013-01-20 11:05:40
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num20062622

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hyc好好 at 2013-01-20 11:05:40
你的酶液纯化了吗？是不是测定的时候吸光值跳动很厉害？如果是的话，你可以选定刚放进去样品时的吸光值和反应剧烈的终点吸光值之差反应活性大小，但是要记录这段时间。最后根据你的计算公式算。个人建议哦。

我的酶液是研磨样品得的提取液..
不需要纯化的吧..
PPO测定的时候是不是会变色?
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6楼2013-02-26 09:38:21
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Alexalex19

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

楼主能否给一篇关于所分氧化酶的英文文章啊。
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7楼2013-02-26 11:30:32
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num20062622

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Alexalex19 at 2013-02-26 11:30:32
楼主能否给一篇关于所分氧化酶的英文文章啊。

我没有英文文章..
我是看一个师姐做过这个我用他的方法做的
结果我的材料测出来就不行..
你也要测这个指标么?
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8楼2013-02-27 08:07:53
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Alexalex19

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by num20062622 at 2013-02-27 08:07:53
我没有英文文章..
我是看一个师姐做过这个我用他的方法做的
结果我的材料测出来就不行..
你也要测这个指标么?...

我不测什么指标，只是想看看英文文献
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9楼2013-02-27 08:24:59
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不死鸟笑笑

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lx11939 at 2013-01-11 15:21:01
多酚氧化酶）的测定
酶液制备：取10g 去皮果肉，加0.5PVPP0.2 mol/L磷酸缓冲液（PH=6.4）中，冰浴研磨，4℃冷冻离心机12000rpm离心20min，取上清液测定酶活性。
活性测定：将0.2ml粗酶提取液加入3ml0.05moL/L（用 ...

要不加大酶液量用0.5mL试试。
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尽力做力所能及的事
10楼2013-08-17 10:11:29
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