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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于zeocin活性的问题
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盼盼小心语

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于zeocin活性的问题 已有2人参与

最近一直在做汉逊酵母转化，用zeocin100微克每毫升抗性平板筛选，但是几次实验发现即使是野生型的酵母摇起来后涂板也能长出单菌落，并且个数很多，换过zeocin还是一样，对zeocin操作避光、低温、无盐也都做到了，是zeocin失活的原因吗？
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1楼 2013-02-21 10:24:49
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Leo_xin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, 鼓励交流！ 2013-02-23 20:13:22
我一般把固体培养基灭菌后放恒温干燥箱内，降温至50℃左右加Z+，用起来都没问题

你换过新的Zeoxin还是没用，应该不是zeoxin的问题吧
最大可能是操作中一些地方你没注意，也有可能wildtype存在问题？？平板中抗性分布均匀也有可能。

生物实验中好多现象用理论都无法解释。。。。。
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还有太多地方值得改进。
2楼2013-02-22 11:23:08
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盼盼小心语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Leo_xin at 2013-02-22 11:23:08
我一般把固体培养基灭菌后放恒温干燥箱内，降温至50℃左右加Z+，用起来都没问题

你换过新的Zeoxin还是没用，应该不是zeoxin的问题吧
最大可能是操作中一些地方你没注意，也有可能wildtype存在问题？？平板中抗性 ...

如果是操作不注意的话无非就是高温或者光失活了吧？倒完平板后我都是报纸包起来的。另外zeocin反复冻融是不是也容易失效啊？
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3楼2013-02-22 14:55:16
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Leo_xin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 盼盼小心语 at 2013-02-22 14:55:16
如果是操作不注意的话无非就是高温或者光失活了吧？倒完平板后我都是报纸包起来的。另外zeocin反复冻融是不是也容易失效啊？...

一般抗生素冻融，不会影响太大（你是37℃样子融的吧）
话说你存储zeoxin的时候外面包不包个锡纸什么的来避光？
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还有太多地方值得改进。
4楼2013-02-23 13:45:26
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zhangxingc: 应助指数+1, 鼓励交流 2013-02-25 09:04:46
Zeocin抗性用起来有时是麻烦一些。倒平板前，要等培养基凉到手背烫，但手心不烫的时候，大概40多度吧。避光其实还好，倒完平板吹板时不开灯就好，储存是放冰箱里就行了。另外，加入抗性后一定要摇匀。至于反复冻融的问题，其实曾经也怀疑过，保险起见，建议买回后迅速分装几管，然后冰上冻融使用，不能室温环境下使用。
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5楼2013-02-24 12:26:59
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盼盼小心语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Leo_xin at 2013-02-23 13:45:26
一般抗生素冻融，不会影响太大（你是37℃样子融的吧）
话说你存储zeoxin的时候外面包不包个锡纸什么的来避光？...

我倒完平板后后不让平板见光，用报纸包起来。储存zeocin的时候小管子是在盒子里的，加抗生素也是等到不烫手避光操作的。搞不懂哪里出问题了呢
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6楼2013-02-25 08:36:17
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盼盼小心语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by reallpf at 2013-02-24 12:26:59
Zeocin抗性用起来有时是麻烦一些。倒平板前，要等培养基凉到手背烫，但手心不烫的时候，大概40多度吧。避光其实还好，倒完平板吹板时不开灯就好，储存是放冰箱里就行了。另外，加入抗性后一定要摇匀。至于反复冻融的 ...

我也试了其他的酵母，不知道是我操作的问题还是真失活了，不敢相信自己了
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7楼2013-02-25 08:38:40
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小小春

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也遇到了这个问题，不知道楼主解决没有，这情况如果不是抗生素失效   出发菌本身莫非就有抗性了？
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8楼2015-09-03 08:55:24
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小灰灰玩AFM

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是不是可以多加一点抗性，我们现在用的是250微克的抗性板子，感觉长的效果还是不错的
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9楼2016-02-22 14:16:24
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