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莜莜草

银虫 (小有名气)

[求助] 用福林酚法测蛋白质相关问题求助 已有1人参与

1.之前一直用考马斯亮蓝和凯氏定氮测蛋白质,查文献发现福林酚主要是测水溶性蛋白,没做过具体的,请问是否可靠?
2.国标福林酚试剂分为A,B两种,实验室之前有买过福林酚试剂,请问这两种有什么区别?只需要把福林酚试剂稀释就可以用了吗?
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般称Lowry法,定量比其它常用方法更准确些。你随便搜搜就能找到很详细的步骤。你也可以直接买试剂盒。
你说的A试剂应该是下面的混合液甲,B试剂是Folin-酚。
原理:磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下,易被酚类化合物还原而呈蓝色反应.蛋白质中含有代酚基的酪氨酸,故有此反应.Folin---酚法的灵敏度是双缩脲法的100倍.
试剂:一:1,4%碳酸钠;2,0.2N氢氧化钠;3,1%硫酸铜;4,2%酒石酸钾钠。1和2等体积混合,3和4等体积混合,然后在实验前将两液以50:1混合(甲)。二:1NFolin--酚试剂(乙)。
方法:标准曲线;试管中加0、0.2、0.40、0.60、1.00毫升酪蛋白溶液(500微克/毫升),加水补足1毫升,平行做两份。按序各加5毫升试剂(甲),摇匀,室温置放10分钟,再依次加入1N(0.5毫升)Folin----酚试剂(乙),摇匀,30摄氏度保温30分钟。然后在分光光度机上比色测定(A500)。待测样品如上反应和测定,对照标准曲线,得出含量。
慎思明辨博学笃行
2楼2014-12-08 21:00:42
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莜莜草

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guoliwang at 2014-12-08 21:00:42
一般称Lowry法,定量比其它常用方法更准确些。你随便搜搜就能找到很详细的步骤。你也可以直接买试剂盒。
你说的A试剂应该是下面的混合液甲,B试剂是Folin-酚。
原理:磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下,易被酚类化合物 ...

非常感谢
3楼2014-12-10 18:34:50
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15071181934

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by guoliwang at 2014-12-08 21:00:42
一般称Lowry法,定量比其它常用方法更准确些。你随便搜搜就能找到很详细的步骤。你也可以直接买试剂盒。
你说的A试剂应该是下面的混合液甲,B试剂是Folin-酚。
原理:磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下,易被酚类化合物 ...

您好,我最近在做福林酚测蛋白的实验,我样品是用醇提的,加入碱性铜后样品变成不透明的,这种情况该怎么处理。福林酚是只能测水溶性蛋白,对醇溶性的不适用吗?
4楼2017-04-30 09:48:49
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