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dawn_destiny

新虫 (正式写手)

[求助] 我提取了两个细菌的基因组DNA后,做16S的PCR,电泳结果求分析! 已有3人参与

PCR使用的引物及温度均已在图上标注,marker图也已上传,希望大家能帮我分析一下为什么P出来的条带很杂而且在3000bp处始终有条带。谢谢!

我提取了两个细菌的基因组DNA后,做16S的PCR,电泳结果求分析!
55℃.png


我提取了两个细菌的基因组DNA后,做16S的PCR,电泳结果求分析!-1
56℃及58℃.png


我提取了两个细菌的基因组DNA后,做16S的PCR,电泳结果求分析!-2
60℃.png


我提取了两个细菌的基因组DNA后,做16S的PCR,电泳结果求分析!-3
100bp Marker.png
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宝杰罗生物

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【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
dawn_destiny(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-10 20:02:58
Taq酶可能污染了,换一个新的试试,还有PCR条件可能有问题,要提高退火温度,把DNA作一个倍比稀释吧。
2楼2014-12-09 16:04:19
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dawn_destiny

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 宝杰罗生物 at 2014-12-09 16:04:19
Taq酶可能污染了,换一个新的试试,还有PCR条件可能有问题,要提高退火温度,把DNA作一个倍比稀释吧。

Taq酶应该是没有污染,我55℃的那个PCR当时还有做另外一个菌,那个菌的P出来16s条带了,还挺亮的,就是这个菌不行。而且我已经把退火温度从55℃提高到60了,还要再提高么?
3楼2014-12-10 09:53:20
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宝杰罗生物

捐助贵宾 (小有名气)


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引用回帖:
3楼: Originally posted by dawn_destiny at 2014-12-10 09:53:20
Taq酶应该是没有污染,我55℃的那个PCR当时还有做另外一个菌,那个菌的P出来16s条带了,还挺亮的,就是这个菌不行。而且我已经把退火温度从55℃提高到60了,还要再提高么?...

继续提高,把模版DNA稀释100倍
4楼2014-12-10 12:22:30
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dawn_destiny

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 宝杰罗生物 at 2014-12-10 12:22:30
继续提高,把模版DNA稀释100倍...

可是我之前P的60℃的已经什么条带都没有了呀。要是再提高的话提到多少度比较合适?
5楼2014-12-11 09:53:51
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-12 12:24:25
要不做个梯度PCR看看吧,温度就从55-60区间
6楼2014-12-11 10:35:57
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dawn_destiny

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-12-11 10:35:57
要不做个梯度PCR看看吧,温度就从55-60区间

哎,我们实验室这边没有那个仪器。
7楼2014-12-12 09:17:21
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yangwang2010

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你提的模板DNA有没有做过电泳,是纯的条带吗?模板不纯P出来可能会不纯の
8楼2014-12-12 13:52:42
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dawn_destiny

新虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yangwang2010 at 2014-12-12 13:52:42
你提的模板DNA有没有做过电泳,是纯的条带吗?模板不纯P出来可能会不纯の

纯的条带是指只有一个条带么?我的确实不是单一条带呢。
9楼2014-12-13 10:56:04
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