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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我提取了两个细菌的基因组DNA后，做16S的PCR，电泳结果求分析！
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dawn_destiny

新虫 (正式写手)

[求助] 我提取了两个细菌的基因组DNA后，做16S的PCR，电泳结果求分析！ 已有3人参与

PCR使用的引物及温度均已在图上标注，marker图也已上传，希望大家能帮我分析一下为什么P出来的条带很杂而且在3000bp处始终有条带。谢谢！

我提取了两个细菌的基因组DNA后，做16S的PCR，电泳结果求分析！
55℃.png


我提取了两个细菌的基因组DNA后，做16S的PCR，电泳结果求分析！-1
56℃及58℃.png


我提取了两个细菌的基因组DNA后，做16S的PCR，电泳结果求分析！-2
60℃.png


我提取了两个细菌的基因组DNA后，做16S的PCR，电泳结果求分析！-3
100bp Marker.png
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1楼 2014-12-07 11:33:43
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宝杰罗生物

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
感谢参与，应助指数 +1
dawn_destiny(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-10 20:02:58
Taq酶可能污染了，换一个新的试试，还有PCR条件可能有问题，要提高退火温度，把DNA作一个倍比稀释吧。
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2楼2014-12-09 16:04:19
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dawn_destiny

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 宝杰罗生物 at 2014-12-09 16:04:19
Taq酶可能污染了，换一个新的试试，还有PCR条件可能有问题，要提高退火温度，把DNA作一个倍比稀释吧。

Taq酶应该是没有污染，我55℃的那个PCR当时还有做另外一个菌，那个菌的P出来16s条带了，还挺亮的，就是这个菌不行。而且我已经把退火温度从55℃提高到60了，还要再提高么？
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3楼2014-12-10 09:53:20
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宝杰罗生物

捐助贵宾 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
引用回帖:
3楼: Originally posted by dawn_destiny at 2014-12-10 09:53:20
Taq酶应该是没有污染，我55℃的那个PCR当时还有做另外一个菌，那个菌的P出来16s条带了，还挺亮的，就是这个菌不行。而且我已经把退火温度从55℃提高到60了，还要再提高么？...

继续提高，把模版DNA稀释100倍
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4楼2014-12-10 12:22:30
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dawn_destiny

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 宝杰罗生物 at 2014-12-10 12:22:30
继续提高，把模版DNA稀释100倍...

可是我之前P的60℃的已经什么条带都没有了呀。要是再提高的话提到多少度比较合适？
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5楼2014-12-11 09:53:51
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-12 12:24:25
要不做个梯度PCR看看吧，温度就从55-60区间
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6楼2014-12-11 10:35:57
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dawn_destiny

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-12-11 10:35:57
要不做个梯度PCR看看吧，温度就从55-60区间

哎，我们实验室这边没有那个仪器。
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7楼2014-12-12 09:17:21
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yangwang2010

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你提的模板DNA有没有做过电泳，是纯的条带吗？模板不纯P出来可能会不纯の
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8楼2014-12-12 13:52:42
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dawn_destiny

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yangwang2010 at 2014-12-12 13:52:42
你提的模板DNA有没有做过电泳，是纯的条带吗？模板不纯P出来可能会不纯の

纯的条带是指只有一个条带么？我的确实不是单一条带呢。
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9楼2014-12-13 10:56:04
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