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zoe回望

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 为什么SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳跑出来老是一条线,没有条带(mark也跑不出来) 已有7人参与

用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳跑蛋白质,不知为什么每次都跑不开,在浓缩胶的时候明显还看见样品间的间隔,但是到了分离胶就跑在一起了,就成了一条蓝色的线(溴酚蓝配液指示),而且跑着跑着蓝色就变黄色了,在机器上读出来只有一条亮带,其他的就什么都没有了,之前以为是浓度不对,所以分离胶7、5%10%15%都跑过,结果也是一样的,样品浓度也是稀释前后电泳效果一样,pH是6、8和8、9,染色的时候也加了B-巯基乙醇的。染色(用的是考然)脱色之后还是一条线,没有任何条带(还有就是我发现我的胶的颜色脱不下来,还是蓝色的,以为时间不够所以有脱过一夜但还是不行)。下面是我的胶体配方,7.5%、10%都跑过。我的蛋白质一次都没跑分开过,电脑上看都是只有一条亮的线,那条线就是上图中的绿色线(以下图做说明),前后半月都在跑胶,可能跑了有40多块,但是都没有一块分开的。前天点了mark,mark是新买的,还是没有跑出来(这个是不是就证明是我胶的原因?能不能给我个胶的配方啊,详细点的)。因为这个原因,我实验一直进行不下去,好着急啊,谢谢。这些是咋回事?谢谢解答~~

为什么SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳跑出来老是一条线,没有条带(mark也跑不出来)
这是胶的配方


为什么SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳跑出来老是一条线,没有条带(mark也跑不出来)-1
这是刚刚跑完的样子
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ben_moody

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
凝胶没形成好,没形成网络结构,拦不住分子

[ 发自小木虫客户端 ]
和光同尘
11楼2014-12-05 14:54:56
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ben_moody

木虫 (正式写手)

引用回帖:
23楼: Originally posted by zoe回望 at 2014-12-06 19:48:35
是因为药品问题还是倒胶之前我混的不均匀?或者是其他原因?...

应该是没形成网络,不是没摇匀的问题。

[ 发自小木虫客户端 ]
和光同尘
25楼2014-12-06 20:09:55
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