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3515

铜虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】sds聚丙烯酰胺电泳上样问题

大家好!我是菜鸟,原来没做过这方面试验
现在的问题是:我的三个样品蛋白浓度分别大致是1mg/ml 2mg/ml 3mg/ml
用的电泳仪六一电泳仪 dycz-24a,是1mm玻璃板间隙,梳子是20孔的

问题1:按蛋白上样20微克的话,用2倍的还是5倍的上样缓冲液啊?我用的缓冲液是含ddt的,配置的时候貌似很难配啊?不溶解.求合适的上样缓冲液配方

2:marker推荐上样量是10微升,如果样品上20微升的话,可以吗?每个孔的上样蛋白量一样外,上样体积也必须相同吗?

3:marker用和上样缓冲液混合吗?

4:20个孔,每个孔都必须上样吗??可不可以留几个不上啊??如果必须上的话只需要用上样缓冲液替代吗?

谢谢各位大侠!
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竹听雨

铁虫 (初入文坛)


★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-02-24 23:00:21
3515(金币+3): 2011-02-25 07:50:02
回答第2,3,4个问题吧:
2,maker量是10ul,样品我们上样是15ul .如果你的孔太小的话20ul不会漂样吗?每个孔的体积最好相同吧
3,marker不用和缓冲液混合
4,其他的孔可以不用上。

如有不对请指正,谢谢。
2楼2011-02-24 21:15:55
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)


★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 辛苦~~ 2011-02-24 22:59:52
3515(金币+3): 2011-02-25 07:50:12
问题1:按蛋白上样20微克的话,用2倍的还是5倍的上样缓冲液啊?我用的缓冲液是含ddt的,配置的时候貌似很难配啊?不溶解.求合适的上样缓冲液配方

都行,我们实验室好像一直都用是3倍的。

2:marker推荐上样量是10微升,如果样品上20微升的话,可以吗?每个孔的上样蛋白量一样外,上样体积也必须相同吗?

20微升会不会冒出点样孔来?一般上样5-10微升就可以了,体积不是必须一样的

3:marker用和上样缓冲液混合吗?

如果你买来的Marker没有混合上样缓冲液的话就要混合;如果已经混好的话,就不必了。

4:20个孔,每个孔都必须上样吗??可不可以留几个不上啊??如果必须上的话只需要用上样缓冲液替代吗?

不是必须都上样的。有人说,不上满的话,会影响挨着空样孔那个样品条带的美观,这个我没验证。如果上的话,用上样缓冲液即可。
3楼2011-02-24 21:16:37
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lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-02-24 23:00:06
3515(金币+1): 2011-02-25 07:50:20
补充:4:20个孔,每个孔都必须上样吗??可不可以留几个不上啊??如果必须上的话只需要用上样缓冲液替代吗?
不能留的,留了的话靠着空泳道的会跑歪的,没有样品的孔一律加1倍上样缓冲液。
4楼2011-02-24 22:06:50
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laoshu16

银虫 (小有名气)


3515(金币+1): 2011-02-26 08:15:43
?A样bf我们用巯基乙醇诶 3x 4x都用过 至于空孔 我们都是空着的 也还好 跑歪的现象不多 严格说是要用1xsample bf 补足的
5楼2011-02-25 20:42:39
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