24小时热门版块排行榜

返回列表

3515

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 289.7
帖子: 46
在线: 4.5小时
虫号: 831788

[交流] 【求助/交流】sds聚丙烯酰胺电泳上样问题

大家好！我是菜鸟，原来没做过这方面试验
现在的问题是：我的三个样品蛋白浓度分别大致是1mg/ml 2mg/ml 3mg/ml
用的电泳仪六一电泳仪 dycz-24a,是1mm玻璃板间隙，梳子是20孔的

问题1：按蛋白上样20微克的话，用2倍的还是5倍的上样缓冲液啊？我用的缓冲液是含ddt的，配置的时候貌似很难配啊？不溶解.求合适的上样缓冲液配方

2：marker推荐上样量是10微升，如果样品上20微升的话，可以吗？每个孔的上样蛋白量一样外，上样体积也必须相同吗？

3：marker用和上样缓冲液混合吗？

4：20个孔，每个孔都必须上样吗？？可不可以留几个不上啊？？如果必须上的话只需要用上样缓冲液替代吗？

谢谢各位大侠！

回复此楼

» 猜你喜欢

依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展已经有1人回复
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有204人回复
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘已经有1人回复
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展已经有0人回复
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选已经有0人回复
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景已经有0人回复
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题已经有0人回复
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预已经有1人回复
西达本胺：创新HDAC抑制剂的抗肿瘤之路已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-02-24 20:51:38

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

竹听雨

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 462.9
帖子: 38
在线: 23.3小时
虫号: 668455

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-02-24 23:00:21
3515(金币+3): 2011-02-25 07:50:02

回答第2，3，4个问题吧：
2，maker量是10ul,样品我们上样是15ul .如果你的孔太小的话20ul不会漂样吗？每个孔的体积最好相同吧
3，marker不用和缓冲液混合
4，其他的孔可以不用上。

如有不对请指正，谢谢。

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2011-02-24 21:15:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

应助: 2 (幼儿园)
贵宾: 2.598
金币: 9923.3
帖子: 8072
在线: 643.5小时
虫号: 676169

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 辛苦~~ 2011-02-24 22:59:52
3515(金币+3): 2011-02-25 07:50:12

问题1：按蛋白上样20微克的话，用2倍的还是5倍的上样缓冲液啊？我用的缓冲液是含ddt的，配置的时候貌似很难配啊？不溶解.求合适的上样缓冲液配方

都行，我们实验室好像一直都用是3倍的。

2：marker推荐上样量是10微升，如果样品上20微升的话，可以吗？每个孔的上样蛋白量一样外，上样体积也必须相同吗？

20微升会不会冒出点样孔来？一般上样5-10微升就可以了，体积不是必须一样的

3：marker用和上样缓冲液混合吗？

如果你买来的Marker没有混合上样缓冲液的话就要混合；如果已经混好的话，就不必了。

4：20个孔，每个孔都必须上样吗？？可不可以留几个不上啊？？如果必须上的话只需要用上样缓冲液替代吗？

不是必须都上样的。有人说，不上满的话，会影响挨着空样孔那个样品条带的美观，这个我没验证。如果上的话，用上样缓冲液即可。

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2011-02-24 21:16:37

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖