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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】sds聚丙烯酰胺电泳上样问题
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3515

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】sds聚丙烯酰胺电泳上样问题

大家好！我是菜鸟，原来没做过这方面试验
现在的问题是：我的三个样品蛋白浓度分别大致是1mg/ml 2mg/ml 3mg/ml
用的电泳仪六一电泳仪 dycz-24a,是1mm玻璃板间隙，梳子是20孔的

问题1：按蛋白上样20微克的话，用2倍的还是5倍的上样缓冲液啊？我用的缓冲液是含ddt的，配置的时候貌似很难配啊？不溶解.求合适的上样缓冲液配方

2：marker推荐上样量是10微升，如果样品上20微升的话，可以吗？每个孔的上样蛋白量一样外，上样体积也必须相同吗？

3：marker用和上样缓冲液混合吗？

4：20个孔，每个孔都必须上样吗？？可不可以留几个不上啊？？如果必须上的话只需要用上样缓冲液替代吗？

谢谢各位大侠！
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1楼 2011-02-24 20:51:38
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laoshu16

银虫 (小有名气)
3515(金币+1): 2011-02-26 08:15:43
?A样bf我们用巯基乙醇诶 3x 4x都用过 至于空孔 我们都是空着的 也还好 跑歪的现象不多 严格说是要用1xsample bf 补足的
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5楼2011-02-25 20:42:39
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竹听雨

铁虫 (初入文坛)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-02-24 23:00:21
3515(金币+3): 2011-02-25 07:50:02
回答第2，3，4个问题吧：
2，maker量是10ul,样品我们上样是15ul .如果你的孔太小的话20ul不会漂样吗？每个孔的体积最好相同吧
3，marker不用和缓冲液混合
4，其他的孔可以不用上。

如有不对请指正，谢谢。
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2楼2011-02-24 21:15:55
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 辛苦~~ 2011-02-24 22:59:52
3515(金币+3): 2011-02-25 07:50:12
问题1：按蛋白上样20微克的话，用2倍的还是5倍的上样缓冲液啊？我用的缓冲液是含ddt的，配置的时候貌似很难配啊？不溶解.求合适的上样缓冲液配方

都行，我们实验室好像一直都用是3倍的。

2：marker推荐上样量是10微升，如果样品上20微升的话，可以吗？每个孔的上样蛋白量一样外，上样体积也必须相同吗？

20微升会不会冒出点样孔来？一般上样5-10微升就可以了，体积不是必须一样的

3：marker用和上样缓冲液混合吗？

如果你买来的Marker没有混合上样缓冲液的话就要混合；如果已经混好的话，就不必了。

4：20个孔，每个孔都必须上样吗？？可不可以留几个不上啊？？如果必须上的话只需要用上样缓冲液替代吗？

不是必须都上样的。有人说，不上满的话，会影响挨着空样孔那个样品条带的美观，这个我没验证。如果上的话，用上样缓冲液即可。
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3楼2011-02-24 21:16:37
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-02-24 23:00:06
3515(金币+1): 2011-02-25 07:50:20
补充：4：20个孔，每个孔都必须上样吗？？可不可以留几个不上啊？？如果必须上的话只需要用上样缓冲液替代吗？
不能留的，留了的话靠着空泳道的会跑歪的，没有样品的孔一律加1倍上样缓冲液。
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4楼2011-02-24 22:06:50
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