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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建32a载体，转化DH5α，转化BL21，菌液pcr总是没有任何条带，怎么回事
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小七sev7en

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建32a载体，转化DH5α，转化BL21，菌液pcr总是没有任何条带，怎么回事 已有2人参与

目的片段800左右，连接32a载体，转化DH5α，菌液测序正确，提取质粒，转化BL21，菌液pcr总是没有任何条带，怎么回事
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1楼 2014-12-02 21:56:01
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小小cool

金虫 (正式写手)
直接质粒pcr不行吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-12-02 23:17:16
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小七sev7en

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-12-02 23:17:16
直接质粒pcr不行吗

直接质粒pcr没用啊。因为我需要表达蛋白
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3楼2014-12-03 17:35:29
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-12-04 10:41:52
你导入的质粒带什么抗性，涂BL21时也加上这个抗性，一般如果BL21平板能长菌话应该就是你要的那个菌了，然后提那个菌进行液体培养直接收集破碎用SDS－PAGE鉴定蛋白不行么？
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4楼2014-12-03 22:10:10
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小七sev7en

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ksws0465326 at 2014-12-03 22:10:10
你导入的质粒带什么抗性，涂BL21时也加上这个抗性，一般如果BL21平板能长菌话应该就是你要的那个菌了，然后提那个菌进行液体培养直接收集破碎用SDS－PAGE鉴定蛋白不行么？

该加的抗性自然是加了。。如果不菌液pcr检测看是否有目的基因，那么贸然往下做也不一定有结果啊
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5楼2014-12-04 14:29:14
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山还在那儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转BL-21没做好吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2014-12-04 17:40:29
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