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小七sev7en

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建32a载体,转化DH5α,转化BL21,菌液pcr总是没有任何条带,怎么回事 已有2人参与

目的片段800左右,连接32a载体,转化DH5α,菌液测序正确,提取质粒,转化BL21,菌液pcr总是没有任何条带,怎么回事
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小小cool

金虫 (正式写手)

直接质粒pcr不行吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-12-02 23:17:16
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小七sev7en

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-12-02 23:17:16
直接质粒pcr不行吗

直接质粒pcr没用啊。因为我需要表达蛋白
3楼2014-12-03 17:35:29
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-12-04 10:41:52
你导入的质粒带什么抗性,涂BL21时也加上这个抗性,一般如果BL21平板能长菌话应该就是你要的那个菌了,然后提那个菌进行液体培养直接收集破碎用SDS-PAGE鉴定蛋白不行么?
4楼2014-12-03 22:10:10
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小七sev7en

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ksws0465326 at 2014-12-03 22:10:10
你导入的质粒带什么抗性,涂BL21时也加上这个抗性,一般如果BL21平板能长菌话应该就是你要的那个菌了,然后提那个菌进行液体培养直接收集破碎用SDS-PAGE鉴定蛋白不行么?

该加的抗性自然是加了。。如果不菌液pcr检测看是否有目的基因,那么贸然往下做也不一定有结果啊
5楼2014-12-04 14:29:14
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山还在那儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
转BL-21没做好吧

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-12-04 17:40:29
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