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静水流燊

新虫 (初入文坛)

[求助] 5’RACE有关问题已有5人参与

最近在做race,我用的是clontech的试剂盒,遇到几个问题,想问问各位大侠,1)我用LA酶P5’端一直没有P出条带来,3’端的有的出来了,也出结果了,5’至今一条也没有出,想不出是我的酶不好,还是我的模板的问题?
2)有的基因我P完了跑胶,发现是从孔里往下一片弥散状,想问这又是什么问题?无论是3’还是5’端都有这样的情况。
我是新手,实验室里也没人做过,希望各位大神能多多帮助我,谢谢!
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你肯定用LA省钱啦,特异引物设计还是得讲究下,估计。你这两点没过关

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-12-02 16:52:23
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
静水流燊(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-02 18:41:21
弥散状就是没P出,是不是引物有问题。
永远相信未知的总是美好的!
3楼2014-12-02 17:32:31
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
静水流燊: 金币+1, 有帮助 2014-12-02 19:38:33
估计你的特异引物设计没弄好,孔里弥散说明没P出来。
hehe
4楼2014-12-02 17:43:27
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仙缘儒侠

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
静水流燊: 金币+1, 有帮助 2014-12-02 19:42:35
有一团说明特异性不行,重新设计GSP吧,
考研
5楼2014-12-02 18:57:45
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静水流燊

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-12-02 16:52:23
你肯定用LA省钱啦,特异引物设计还是得讲究下,估计。你这两点没过关

的确是因为省钱才用的,那若是想P出来那用什么酶会比较好,麻烦了
6楼2014-12-02 19:38:11
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静水流燊

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-12-02 17:43:27
估计你的特异引物设计没弄好,孔里弥散说明没P出来。

我重新设计了,不过我想问怎样才算特异性好,我看那些也都是8、90分的,我都是用primer5.0设计的,还有别的方法么
7楼2014-12-02 19:40:03
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静水流燊

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 仙缘儒侠 at 2014-12-02 18:57:45
有一团说明特异性不行,重新设计GSP吧,

怎样设计,我都是用primer5.0设计的,感觉都差不多,还有什么讲究么?
8楼2014-12-02 19:43:54
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 静水流燊 at 2014-12-02 19:43:54
怎样设计,我都是用primer5.0设计的,感觉都差不多,还有什么讲究么?...

primer5.0不怎么地,建议用priner-blast算算

[ 发自小木虫客户端 ]
9楼2014-12-02 20:05:10
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静水流燊

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-12-02 20:05:10
primer5.0不怎么地,建议用priner-blast算算
...

是primer-blast么,我用过一次,不过怎么看引物的好坏,以及单个引物设计,好吧,我是新手,完全没有头绪
10楼2014-12-02 20:38:03
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