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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 5’RACE有关问题
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 静水流燊 at 2014-12-02 20:38:03
是primer-blast么，我用过一次，不过怎么看引物的好坏，以及单个引物设计，好吧，我是新手，完全没有头绪...

这个工具有文献报道的，Google一下

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2014-12-02 20:46:31
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ycky2010

金虫 (小有名气)
你的问题应该是引物或模板问题。建议从这两点考虑

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2014-12-05 13:00:28
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随风追梦

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
静水流燊(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-07 19:50:28
静水流燊: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-12-08 08:52:26
我也在做这个，不过我觉得还是你的模板或者ＲＴ之前的步骤的问题可能比较大，个人认为Nested PCR前面的步骤很关键，后面的也就和普通ＰＣＲ差不多，所以不认为是你ＬＡ的问题。
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初心不改！
13楼2014-12-06 21:53:35
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静水流燊

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 随风追梦 at 2014-12-06 21:53:35
我也在做这个，不过我觉得还是你的模板或者ＲＴ之前的步骤的问题可能比较大，个人认为Nested PCR前面的步骤很关键，后面的也就和普通ＰＣＲ差不多，所以不认为是你ＬＡ的问题。

你是说我的模板有问题，也对，我5’端的还没有跑出来条带过，不过3’端的到时出来了，是不是RNA降解了？然后你说后面酶用LA就没问题吧 ，谢谢！
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14楼2014-12-08 08:52:16
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随风追梦

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 静水流燊 at 2014-12-08 08:52:16
你是说我的模板有问题，也对，我5’端的还没有跑出来条带过，不过3’端的到时出来了，是不是RNA降解了？然后你说后面酶用LA就没问题吧 ，谢谢！...

这个至于是不是RNA降解我不好说，但是我个人认为RNA问题的可能性应该是最大的，其次开个玩笑就是人品问题（不同人的操作可能会导致不同结果的这个有切身体会）。多试验几次或许就好了。加油。
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初心不改！
15楼2014-12-08 18:23:37
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