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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5‘RACE老是做不出来，谁指点我一下
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)

[求助] 5‘RACE老是做不出来，谁指点我一下

5‘RACE做了半年了还没弄出来，烦死我啦！谁能指点我一下，谢谢，有金币送哦
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关关雎鸠，在河之洲
1楼 2012-08-24 09:49:41
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这要怎么说了，做不出来原因有很多，一时半会也说不清，做分子就这样。
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2楼2012-08-24 11:13:19
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不过我们实验室用的是Clonetec的RACE试剂盒，效果还行，实验都还顺利吧。想问一下你们做RACE用的是？
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3楼2012-08-24 11:15:50
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不过我们实验室用的是Clonetec的RACE试剂盒，效果还行，实验都还顺利吧。想问一下你们做RACE用的是？
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4楼2012-08-24 11:19:26
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wmq682

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 14:51:40
我用的invitrogen的，感觉比较好做，反向设计3条引物，用最外侧的做反转录，用内侧的两条做NEST, 就照着说明书做，用PCR仪做上述反应，各步骤时间上的控制不一定按着说明书的来的，可以多一点也没关系。去年的时候第一次做，加上克隆测序一周多就完成了，后来又做了一个，也是同样顺利的。
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5楼2012-08-24 11:28:42
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wmq682 at 2012-08-24 11:28:42
我用的invitrogen的，感觉比较好做，反向设计3条引物，用最外侧的做反转录，用内侧的两条做NEST, 就照着说明书做，用PCR仪做上述反应，各步骤时间上的控制不一定按着说明书的来的，可以多一点也没关系。去年的时候第 ...

我用的clontech的，扩病毒序列，但是扩出来的却是寄主植物的，我很郁闷，明明设计的引物也算是特异的了，为什么老这样的结果呢，你做的是什么序列，能把你的具体方法告诉我吗
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关关雎鸠，在河之洲
6楼2012-08-24 11:56:41
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杀手13

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做了2个月，好烦啊。innerPCR有时候有，有时候没有，回收也回收不到。
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希望本无所谓有也无所谓无
7楼2012-08-24 19:39:11
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
我们实验室连试剂盒都没买，我现在做5‘也头疼着呢。做了一个月了，测出来序列竟然不是，郁闷啊。
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8楼2012-08-24 22:18:43
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fangyanni

铁虫 (小有名气)
我用的takara试剂盒，也是做不出来，郁闷死了，invitrogen的太贵了买不起呀，模板引物，退火温度都换过，而且模板质量很好，真不知道问题出在哪里
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9楼2012-08-31 13:25:16
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apple712

银虫 (初入文坛)
也做了一个月的5‘了，用clontech的kit，还是没有出来，悲催的~
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10楼2012-08-31 20:27:55
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