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苏拉的世界

金虫 (著名写手)

[求助] 5‘RACE老是做不出来,谁指点我一下

5‘RACE做了半年了还没弄出来,烦死我啦!谁能指点我一下,谢谢,有金币送哦
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关关雎鸠,在河之洲
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这要怎么说了,做不出来原因有很多,一时半会也说不清,做分子就这样。
2楼2012-08-24 11:13:19
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不过我们实验室用的是Clonetec的RACE试剂盒,效果还行,实验都还顺利吧。想问一下你们做RACE用的是?
3楼2012-08-24 11:15:50
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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不过我们实验室用的是Clonetec的RACE试剂盒,效果还行,实验都还顺利吧。想问一下你们做RACE用的是?
4楼2012-08-24 11:19:26
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wmq682

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 14:51:40
我用的invitrogen的,感觉比较好做,反向设计3条引物,用最外侧的做反转录,用内侧的两条做NEST, 就照着说明书做,用PCR仪做上述反应,各步骤时间上的控制不一定按着说明书的来的,可以多一点也没关系。去年的时候第一次做,加上克隆测序一周多就完成了,后来又做了一个,也是同样顺利的。
5楼2012-08-24 11:28:42
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苏拉的世界

金虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wmq682 at 2012-08-24 11:28:42
我用的invitrogen的,感觉比较好做,反向设计3条引物,用最外侧的做反转录,用内侧的两条做NEST, 就照着说明书做,用PCR仪做上述反应,各步骤时间上的控制不一定按着说明书的来的,可以多一点也没关系。去年的时候第 ...

我用的clontech的,扩病毒序列,但是扩出来的却是寄主植物的,我很郁闷,明明设计的引物也算是特异的了,为什么老这样的结果呢,你做的是什么序列,能把你的具体方法告诉我吗
关关雎鸠,在河之洲
6楼2012-08-24 11:56:41
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杀手13

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我做了2个月,好烦啊。innerPCR有时候有,有时候没有,回收也回收不到。
希望本无所谓有也无所谓无
7楼2012-08-24 19:39:11
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

我们实验室连试剂盒都没买,我现在做5‘也头疼着呢。做了一个月了,测出来序列竟然不是,郁闷啊。
8楼2012-08-24 22:18:43
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fangyanni

铁虫 (小有名气)

我用的takara试剂盒,也是做不出来,郁闷死了,invitrogen的太贵了买不起呀,模板引物,退火温度都换过,而且模板质量很好,真不知道问题出在哪里
9楼2012-08-31 13:25:16
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apple712

银虫 (初入文坛)

也做了一个月的5‘了,用clontech的kit,还是没有出来,悲催的~
10楼2012-08-31 20:27:55
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