| 查看: 1647 | 回复: 6 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
强疏水性蛋白跑非变性蛋白电泳不易进胶 已有2人参与
|
||||
| 目标蛋白来源是细菌，菌体破碎高速离心得到粗提液。在用粗提液做疏水作用色谱时发现目标蛋白疏水性很强，洗脱时20mM的Tris都不能将明白蛋白洗脱下来，需要用超纯水才可以。将疏水作用色谱纯化用超纯水洗脱下来的包含木蛋白的部分收集，超滤浓缩到1mL左右。由于疏水色谱纯化的洗脱液几乎全是超纯水，所以添加20mM Tris（pH9.0），20mM NaCl，5%甘油，1mM PMSF（异丙醇溶解的100mM浓度的母液）。冰上平衡10分钟后上样做非变性蛋白电泳。蛋白电泳用37.5:1比例的胶配置，pH9.0。上层胶浓度为4%，下层胶浓度为6%。电泳初始20分钟电泳为100V，之后电泳为300V，持续2h。电泳结束后，根据目标蛋白活性染色，发现目标蛋白停留在上样槽底部，未进入胶体。如果将电泳仪的电极倒置后，则目标蛋白会进入电泳缓冲液。所以可以排除蛋白电荷的因素。是不是明白蛋白沉淀了啊？请各位专家给分析下吧，多谢啦！ |
回复此楼» 猜你喜欢
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章
已经有6人回复
-
职称评审没过，求安慰
已经有56人回复
-
26申博自荐
已经有3人回复
-
A期刊撤稿
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Native非变性凝胶电泳，marker没跑开。。
已经有16人回复
- PCR-SSCP非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中的交联度指的是什么？怎么计算？
已经有4人回复
- 分子量接近，电荷接近的蛋白质怎么分离开来？
已经有16人回复
- 如何处理后盐酸胍变性的蛋白液，跑SDS-PAGE电泳。
已经有5人回复
- “非变性胶电泳测定蛋白质分子量”？慎用！
已经有17人回复
- 蛋白非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳没有条带
已经有7人回复
- 求助关于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳液
已经有3人回复
- 为什么我的DNA 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 跑成这个鬼样？
已经有12人回复
- 【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有16人回复
- 请教为什么我的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后条带有些弥散！
已经有9人回复
- DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳所用loading buffer
已经有7人回复
- 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离DNA
已经有8人回复
- 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，染色问题
已经有8人回复
- 【分享】新手上路 Western blot问题集合
已经有6人回复
- 【求助/交流】非变性蛋白电泳用什么marker
已经有5人回复
- 【原创】非变性凝胶电泳原理及应用实例
已经有48人回复
- 【求助/交流】关于8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】有意思的rna非变性凝胶电泳-之真相大白
已经有10人回复
- 非变性蛋白电泳Marker哪里有卖
已经有9人回复
送红花一朵 
4楼2014-12-14 15:19:00
2楼2014-12-09 17:22:35
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19286.6
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6566
- 在线: 2766.5小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
cisong: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 应该是你所说的那种情况，目标蛋白跟细胞壁连在一起了。谢谢大牛！！！ 2014-12-14 18:21:03
cisong: 金币+50, ★★★★★最佳答案, 应该是你所说的那种情况，目标蛋白跟细胞壁连在一起了。谢谢大牛！！！ 2014-12-14 18:21:03
| 疏水性大到只能用纯水才能洗脱下来的蛋白质也是能跑胶的，跑不进去可能是等电点太高，在pH9.0的时候不带多少电荷就不动了。我也有一个蛋白质在pH8.0几乎不进胶的，正常。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2014-12-10 01:25:33
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19286.6
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6566
- 在线: 2766.5小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
5楼2014-12-14 15:47:26