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圣者为王

铁虫 (初入文坛)

[交流] cDNA跑普通PCR疑问 已有3人参与

利用新提出来的cDNA跑普通的PCR，10μl体系，退火温度利用53℃，actin基因能跑出来，但是为什么目的基因跑不出来，请求各位帮忙解决，不胜感激。
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1楼 2014-11-19 23:06:04
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孙士超

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-20 17:10:17
以前用cDNA做模板P吗？可以考虑换一下模板，退火温度一般影响不是非常大，只有亮不亮的区别，再就是你可以换一个20μl体系试一下
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不放弃就有希望
2楼2014-11-20 11:49:37
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happydove

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
内参能扩出来 一般模板问题不大
那就从你实验的设计考虑，这个基因有表达吗
还有你设计的引物没问题吧
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3楼2014-11-20 13:26:31
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圣者为王

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙士超 at 2014-11-20 11:49:37
以前用cDNA做模板P吗？可以考虑换一下模板，退火温度一般影响不是非常大，只有亮不亮的区别，再就是你可以换一个20μl体系试一下

平时也有用cDNA做模版p的，我试一下换个体系试试，谢过了。
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4楼2014-11-21 10:14:28
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圣者为王

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by happydove at 2014-11-20 13:26:31
内参能扩出来 一般模板问题不大
那就从你实验的设计考虑，这个基因有表达吗
还有你设计的引物没问题吧

这基因正在做重组表达，第一步就卡住了，引物设计有问题应该也有很多杂带不是吗？非常感谢
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5楼2014-11-21 10:17:37
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刘芬玲

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
actin能扩出来说明模板没什么大问题，主要应该是引物的问题，先调一下退火温度试试
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6楼2014-11-22 09:00:00
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