应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 双抗夹心ELISA方法的建立
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1609  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

电风扇魏哥

金虫 (正式写手)

[求助] 双抗夹心ELISA方法的建立 已有6人参与

我做双抗夹心ELISA时遇到下面的情况，求高手指教“一抗+5%的脱脂奶粉封闭+阴阳血清及空白对照+自己标记的HRP二抗+显色+终止“，结果阴性和空白都呈阳性，能不能帮忙分析分析是什么原因造成的？？？？？？？？？？
一抗和二抗都是由本实验室自己制备的！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-13 15:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

电风扇魏哥

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sfeqhl at 2014-11-19 18:10:09
为什么不先封闭再加一抗呢？

谢谢您的回复，您的意思是  “封闭 + 一抗 + 5%的脱脂奶粉封闭  + 阴阳血清及空白对照 + 自己标记的HRP二抗 + 显色 + 终止”吗？这样的设计我还没有试过。现在我降低了包被一的抗浓度，使用0.2%的吐温-20洗板，可还是全部显色，很着急，快毕业了，求高手指点
赞一下 回复此楼
6楼2014-11-25 16:16:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-11-25 17:32:20
封闭或非特异性结合······
赞一下 回复此楼
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
2楼2014-11-14 21:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiguyuan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-11-25 17:32:30
电风扇魏哥: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-05-04 14:53:43
第一，你的阴性血清是从哪里来的？这些东西不能自己随随便便制备，需要从正规科研所购买
第二，你的二抗是是否确实标记上了，是否验证能否显色，可能是你中间的步骤不合理，我们没有看到这个关键的标记步骤不能随便下结论
第三，你的显色液是否用二抗证明有显色，如果没有，可取少量显色液加入少量二抗证明之
第四，你的包被蛋白用的包被液是什么成分，一般情况下是碳酸盐  ，另外是否证明已经包被上了？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-15 07:25:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

long20081990

新虫 (初入文坛)
空白都显阳性首先确定你这组实验错误。
原因第一：加二抗后洗了没。
      第二：如果洗了，那就说明二抗交联上去了，有可能封闭液过期了，或者封闭液没有封闭上(时间，温度等）。
     第三：很多时候有一些抗体会出现一抗与二抗直接交联的情况（应该很上吧，但我就碰到过一次，实在洛阳百泰科买的）。
     第四：你必须确定你空白是不是加错了。
     第五：显色剂变质了，我最开始做的时候TMB自配就出现过这种问题，它自己都变色了。
如果你的实验操作正确的话，应该是没封闭好吧（或者你的脱脂奶风有问题啊，买点BSA 试试便宜的。其它原因你在做实验的时候很容易就发现了。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2014-11-18 11:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +10 Mr. Z 2026-03-25 10/500 2026-03-29 00:34 by 我是小康
[考研] 本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 7/350 2026-03-28 21:40 by zhq0425
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +7 幸运哩哩 2026-03-22 11/550 2026-03-28 20:27 by 唐沐儿
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-27 5/250 2026-03-28 14:25 by 唐沐儿
[考研] 0703化学求调剂 +9 奶油草莓. 2026-03-22 10/500 2026-03-28 13:30 by 唐沐儿
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +12 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-03-28 10:56 by self2008
[考博] 26申博 +3 加油冲啊！ 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 一志愿北化求调剂 +3 Jsman 2026-03-22 3/150 2026-03-26 21:06 by ajpv风雷
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭