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散仙孔乙己新虫 (小有名气)
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[求助]
怎样测蛋白质中的二硫键含量 已有1人参与
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| 我现在打算测我样品中的二硫键含量，但是查文献发现测二硫键一般用NTSB溶液，配置很麻烦，我师姐之前也配过，失败了，所以我想请教一下有没有什么其他适的方法 |
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1012203014
金虫 (正式写手)
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测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。 巯基含量的计算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值 D—稀释倍数 C—样品浓度（mg/mL） 问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性 问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法 谢谢了  |
10楼2015-10-07 15:51:12
2楼2014-11-10 20:02:26
散仙孔乙己
新虫 (小有名气)
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3楼2014-11-11 09:30:25
4楼2014-11-11 09:44:19
