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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 怎样测蛋白质中的二硫键含量
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散仙孔乙己

新虫 (小有名气)

[求助] 怎样测蛋白质中的二硫键含量 已有1人参与

我现在打算测我样品中的二硫键含量，但是查文献发现测二硫键一般用NTSB溶液，配置很麻烦，我师姐之前也配过，失败了，所以我想请教一下有没有什么其他适的方法
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1楼 2014-11-10 19:38:34
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1012203014

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by m919 at 2014-11-11 09:44:19
巯基的变化不是也可以反应出二硫键么？  活性巯基氧化成二硫键。楼主是考察一定贮藏期内的品质变化吗？...

测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。
巯基含量的计算公式如下：
SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C
式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值
D—稀释倍数
C—样品浓度（mg/mL）
问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？
问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性
问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法
谢谢了
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奋斗！永不止步！
10楼2015-10-07 15:51:12
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m919

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
散仙孔乙己: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-11-11 10:19:49
有试剂盒的吧？ 而且测-SH不是一样的吗？
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不是我不想去赚那8个BB，而是可选项找不到我的专业……
2楼2014-11-10 20:02:26
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散仙孔乙己

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by m919 at 2014-11-10 20:02:26
有试剂盒的吧？ 而且测-SH不是一样的吗？

我就两个样品，买试剂盒太浪费了。总巯基我测了，就是没测二硫键
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3楼2014-11-11 09:30:25
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m919

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 散仙孔乙己 at 2014-11-11 09:30:25
我就两个样品，买试剂盒太浪费了。总巯基我测了，就是没测二硫键...

巯基的变化不是也可以反应出二硫键么？  活性巯基氧化成二硫键。楼主是考察一定贮藏期内的品质变化吗？
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不是我不想去赚那8个BB，而是可选项找不到我的专业……
4楼2014-11-11 09:44:19
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