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关于多肽合成中二硫键的问题，着急！ 已有1人参与
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| 各位大侠：本人在做二硫键的多肽，总共9个氨基酸，在HPLC分析时，单一的分析环化前后样品，略微能分得开（能考到两个峰靠的很近，但不重合），当把两个样品混合后无法分开，就一个峰。后来采用Ellman检测试剂检测巯基含量，经过计算后成二硫键前为0.0000473，环化后测得0.00000217.能不说明环化完成？我找的资料只说怎么测，怎么算，并没有说达到什么标准为环化完成。请高手帮忙，谢谢啦！ |
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shale1983
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测定总巯基含量时，15 mg蛋白样品溶解于5 mL含8 M 尿素的Tris-Gly 缓冲液（0.086 M Tris, 0.09 M Gly 和 0.04 M EDTA, pH 8.0）。测定自由巯基含量时，15 mg样品溶解于5 mL不含尿素的上述Tris-Gly 缓冲液中，而后加入50 μL Ellman 试剂 （DTNB, 即5,5-二硫基双2-硝基苯甲酸溶于Tris-Gly 缓冲液，4 mg/mL），在25℃条件下保温反应60 min, 离心（5000 g, 15 min），上清液在412 nm 处测定吸光值，以含Ellman 试剂的Tris-Gly 缓冲液为空白对照。 巯基含量的计算公式如下： SH (μmol/g) = 73.53×A ×D/C 式中：A —除去试剂空白后样品的吸光度值 D—稀释倍数 C—样品浓度（mg/mL） 问题1：上述公式中稀释倍数D是怎么算的（具体的式子），如果完全按照上述方法是不是就是1？ 问题2：我测的物质为毛发固体样品，二硫键含量在350μmol/g附近，此种测试方法是否具有可行性 问题3：由于毛发样品中含有非水溶性蛋白，又没哟测量二硫键含量的更好的方法 谢谢了  |
8楼2015-10-07 15:54:15
