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id90

铜虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母GS115甲醇诱导发酵液颜色? 已有3人参与

最近做毕赤酵母GS115发酵,胞外表达目的蛋白。在换BMMY培养基时,已经加入了抗生素,甲醇诱导后,通常发酵液为黄色,但是有时候会出现发酵液变绿的现象。基本上十个会出现一两个,有时候隔一天出现一个。这种现象是正常的,还是染菌了? 辛苦发酵不容易,不舍得扔掉  求解答,谢谢!!!
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烟雨莫问

金虫 (小有名气)

毕赤酵母发酵过程中产生的色素主要是绿色的,只要用甲醇启动子的都会产生,它是醇氧化酶(Aox1p).引起的,该酶在高密度发酵过程中会形成同源八聚体与FAD结合,形成发色基团。只有甲醇诱导后才会产生,诱导之前不会出现,它并不是分泌酶,是到了发酵后期,随着细胞的裂解释放到培养基中的,所以培养基颜色很绿。通过这个也可以大体判定诱导的程度。
11楼2014-12-21 19:57:31
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
id90: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2014-10-24 00:33:48
变绿色我也是有碰到过的,主要还是发酵添加的微量元素盐PTM1/4里的亚铁离子,而且你也说了静置后会变为深黄色,这都属于正常情况;毕赤酵母进入诱导阶段,染菌的可能性是比较小的,可以大胆做,当然在有怀疑的时候还应该做做镜检(但这个主要是在BMGY阶段做)。
我有次做500L罐时,甲醇加多了直接加自来水照样发酵做,过滤除菌都没有,直接桶接了从入料口倒进去,也不会染菌。
做实验不要怕,了不起就是重复,听你的描述应该还在摇瓶阶段,大胆做。另外甲醇诱导阶段应该没有加抗生素的必要了。
至于你说的出现绿色时间不同,这个我猜测性的说下,每个摇瓶毕竟不同,且毕赤酵母发酵时产酸的,那菌的生长状态和时期不同,发酵液的pH值也都是不同的,那么呈现颜色时间有差别也比较正常。
7楼2014-10-21 23:27:11
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普通回帖

id90

铜虫 (初入文坛)

补充一下,绿色的发酵液,我静置一段时间后,发酵液绿色变淡了,呈深黄色了!
2楼2014-10-17 23:26:57
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树2979

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以做镜检看看是否有杂菌

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-10-17 23:55:00
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id90

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 树2979 at 2014-10-17 23:55:00
可以做镜检看看是否有杂菌

恩 谢谢回复 这个我准备做 您做过毕赤酵母发酵吗 我希望和做过毕赤酵母发酵的 比对一下 找出问题出在哪
4楼2014-10-18 00:22:26
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jjwhl

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by id90 at 2014-10-18 00:22:26
恩 谢谢回复 这个我准备做 您做过毕赤酵母发酵吗 我希望和做过毕赤酵母发酵的 比对一下 找出问题出在哪...

毕赤酵母正常发酵,应该是乳白色,染菌会呈褐色,但没见过你的绿色
5楼2014-10-18 22:50:19
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id90

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jjwhl at 2014-10-18 22:50:19
毕赤酵母正常发酵,应该是乳白色,染菌会呈褐色,但没见过你的绿色...

在摇床震荡中颜色偏绿,从摇床拿出来静置一会,就成深黄色了。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-10-19 11:37:57
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拂晓晨风

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

毕赤酵母诱导时间长了,颜色变绿或者黄绿色很正常。在发酵罐上更明显。
8楼2014-10-22 21:37:55
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id90

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by reallpf at 2014-10-21 23:27:11
变绿色我也是有碰到过的,主要还是发酵添加的微量元素盐PTM1/4里的亚铁离子,而且你也说了静置后会变为深黄色,这都属于正常情况;毕赤酵母进入诱导阶段,染菌的可能性是比较小的,可以大胆做,当然在有怀疑的时候还 ...

最近才看见回复,真的是太感谢了!我最近才开始做实验,总是怕做错,没出结果也很着急,看了你的回复,我对自己也有些信心了! 谢谢!!!
9楼2014-10-24 00:26:08
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id90

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 拂晓晨风 at 2014-10-22 21:37:55
毕赤酵母诱导时间长了,颜色变绿或者黄绿色很正常。在发酵罐上更明显。

谢谢回复,发酵呈绿色也是正常现象,感谢解答了我的疑惑。
10楼2014-10-24 00:33:38
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