| 查看: 1140 | 回复: 2 | ||
lianchen1218金虫 (正式写手)
|
[求助]
蛋白印记封闭液稀释液问题 已有1人参与
|
开始做蛋白印记一年了，最近才发现有个步骤搞错了，之前是medium配方搞错了好几个月，实验就在各种重复中缓慢进行，真心觉得自己真不适合搞科研 。想问各位大侠，我用的5%的牛奶封闭液，应该是用TBST配置牛奶，而我一直用的蒸馏水来配置，封闭和二抗孵育都是用的蒸馏水配置的牛奶作为稀释液，实验室有个博后说这样会影响实验结果，我也不知道会有多大影响，我的膜显色出来也没有高背景。请大家帮忙指点分析一下，这样做的后果有多严重，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有223人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- ELISA实验中，抗原和抗体的稀释液问题
已经有3人回复
- WB 封闭液 tween 浓度
已经有21人回复
- western之抗体选择问题
已经有8人回复
- western洗涤液，封闭液，一抗稀释液和二抗稀释液的配制
已经有6人回复
- 双抗体夹心ELISA的梯度浓度标准品实验结果确无梯度变化，真心求大家帮忙分析原因！
已经有23人回复
- western blot封闭液用的水配置，对实验结果会有影响吗
已经有3人回复
- 抗体用什么稀释好啊?
已经有11人回复
- 就要被免疫荧光折磨疯了，大侠啊，求救啊！！！
已经有18人回复
- WB抗体孵育问题！
已经有7人回复
- 【求助】菜鸟自学 western blot 关于一抗 ，二抗
已经有5人回复
- PVDF膜 的曝光问题
已经有14人回复
- western抗体稀释、孵育的时间与条件的疑惑与不解
已经有10人回复
- 【求助/交流】关于ELISA中，使用封闭蛋白的问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】酪蛋白的封闭溶液怎么配
已经有5人回复
- 【求助/交流】斑点印迹（dot blotting）
已经有6人回复
ssssllllnnnn 
至尊木虫 (知名作家)
Translator and Proofreader
- 应助: 452 (硕士)
- 金币: 31580.9
- 红花: 100
- 帖子: 7681
- 在线: 19966.6小时
- 虫号: 3328089
- 注册: 2014-07-17
- 专业: 肿瘤发生
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lianchen1218: 金币+30, ★★★★★最佳答案 2014-10-03 15:24:18
感谢参与，应助指数 +1
lianchen1218: 金币+30, ★★★★★最佳答案 2014-10-03 15:24:18
| Western blot就是利用抗原和抗体特异性相互作用的特点进行的，基础是蛋白与蛋白之间的特异性相互作用，这种作用是需要一定条件的，主要的条件之一就是盐的浓度。盐浓度太高或太低都不利于这种相互作用。正常情况下，blocking过程以及后续的一抗、二抗孵育过程都需要在这种合适条件下进行，所以需要在TBST或者其他类似缓冲液中进行（如PBST等）。如果你直接用水代替缓冲液，我想结果一定不理想，因为没有提高合适的条件。不理想的结果应该主要是得不到特异性信号，如果抗体好而且蛋白表达高，兴许也可以得到一些弱信号。至于background，那要一定是很干净的：在这么差的条件下，蛋白之间的非特异性结合恐怕很难的，所以你的blot应该很干净，乃至特异性信号都没有或者非常弱。 |
2楼2014-10-02 23:20:43
lianchen1218
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2086.6
- 散金: 197
- 红花: 17
- 帖子: 679
- 在线: 289.3小时
- 虫号: 1093159
- 注册: 2010-09-08
- 性别: MM
- 专业: 基础兽医学
3楼2014-10-03 15:24:00
