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begining

木虫 (小有名气)

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[求助] western洗涤液，封闭液，一抗稀释液和二抗稀释液的配制已有2人参与

求助各位做过western的兄弟姐妹：western洗涤液，封闭液，一抗稀释液和二抗稀释液如何配制？因为第一次做，技术生疏，浪费的试剂也多些，买的现成的试剂量太少，所以想自己配制。谢谢！

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1楼 2013-07-19 09:06:30

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lillian菲

银虫 (小有名气)

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你可以看看一些目录书后面都有详细的说明，我都是照上面的配的，很好用哦

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2楼2013-07-19 09:44:45

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sc5921041

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
begining(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-19 12:01:41

封闭液是TBST缓冲液+3%豆奶粉配置的(100ml+3g奶粉），一抗和二抗都是用这个配置的牛奶一样的溶液来稀释，稀释的倍数取决于你的抗体和蛋白，如果抗体很好检测容易，比如说loading control 1:8000甚至10000都可以，不好检测的话可以1:200-500.

TBST的配方你可以去网上搜 TBST就是TBS+Tween-20

当然也有人用PBS来做，我们都用TBST

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nostalgia

3楼2013-07-19 10:55:33

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永峰1230

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★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-16 08:55:07

引用回帖:

3楼: Originally posted by sc5921041 at 2013-07-19 10:55:33
封闭液是TBST缓冲液+3%豆奶粉配置的(100ml+3g奶粉），一抗和二抗都是用这个配置的牛奶一样的溶液来稀释，稀释的倍数取决于你的抗体和蛋白，如果抗体很好检测容易，比如说loading control 1:8000甚至10000都可以，不 ...

请问， BSA 需要多大的浓度做封闭液和抗体稀释好呢?　　　　一抗二抗　　使用ＴＢＳＴ　　封闭液使用　　ＢＳＡ　　合适吗？？（包括　合理性和　经济性）