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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western洗涤液，封闭液，一抗稀释液和二抗稀释液的配制
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begining

木虫 (小有名气)

[求助] western洗涤液，封闭液，一抗稀释液和二抗稀释液的配制 已有2人参与

求助各位做过western的兄弟姐妹：western洗涤液，封闭液，一抗稀释液和二抗稀释液如何配制？因为第一次做，技术生疏，浪费的试剂也多些，买的现成的试剂量太少，所以想自己配制。谢谢！
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1楼 2013-07-19 09:06:30
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lillian菲

银虫 (小有名气)
你可以看看一些目录书后面都有详细的说明，我都是照上面的配的，很好用哦
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2楼2013-07-19 09:44:45
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sc5921041

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
begining(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-19 12:01:41
封闭液是TBST缓冲液+3%豆奶粉配置的(100ml+3g奶粉），一抗和二抗都是用这个配置的牛奶一样的溶液来稀释，稀释的倍数取决于你的抗体和蛋白，如果抗体很好检测容易，比如说loading control 1:8000甚至10000都可以，不好检测的话可以1:200-500.

TBST的配方你可以去网上搜  TBST就是TBS+Tween-20

当然也有人用PBS来做，我们都用TBST
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nostalgia
3楼2013-07-19 10:55:33
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-16 08:55:07
引用回帖:
3楼: Originally posted by sc5921041 at 2013-07-19 10:55:33
封闭液是TBST缓冲液+3%豆奶粉配置的(100ml+3g奶粉），一抗和二抗都是用这个配置的牛奶一样的溶液来稀释，稀释的倍数取决于你的抗体和蛋白，如果抗体很好检测容易，比如说loading control 1:8000甚至10000都可以，不 ...

请问， BSA 需要多大的浓度  做封闭液和  抗体稀释好呢?　　　　一抗二抗　　使用ＴＢＳＴ　　封闭液使用　　ＢＳＡ　　合适吗？？（包括　合理性和　经济性）
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12
4楼2014-04-12 19:35:26
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luanfeiren

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-16 08:55:21
一抗比例1:1000，二抗1:5000，这个可以的
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5楼2014-04-15 21:19:13
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double可

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-16 08:55:25
一抗和二抗的比例是要自己尝试的，一般一抗都会有说明说建议的比例，可以从建议的比例尝试起
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早已不承认还有什么神
6楼2014-04-16 08:35:32
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爱维

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sc5921041 at 2013-07-19 10:55:33
封闭液是TBST缓冲液+3%豆奶粉配置的(100ml+3g奶粉），一抗和二抗都是用这个配置的牛奶一样的溶液来稀释，稀释的倍数取决于你的抗体和蛋白，如果抗体很好检测容易，比如说loading control 1:8000甚至10000都可以，不 ...

您好，请问您觉得TBST好还是PBS好呢？
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7楼2017-05-22 10:13:40
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