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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB 封闭液 tween 浓度
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

[求助] WB 封闭液 tween 浓度 已有4人参与

有人说：   由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时最好使用较温和的Tween20，而且浓度不要超过0.3%（据说0.05%效果最好）。------------------这样 可以吗
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12
1楼 2014-04-07 15:54:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

weskerZXC

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-04-09 21:05:33
我们是千分之一，效果不错
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2楼2014-04-09 13:36:56
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sunrq516516

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-09 21:05:27
恩，我们实验室一直用的是0.05% tween 20 in TBS。感觉blocking的时间长点会好一些。有些同事做过4度 blocking overnight，感觉相当不错……
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Permanent head Damage
3楼2014-04-09 14:42:52
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huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-09 21:05:18
0.05% Tween 20，在PBS中，配成5%的MPBST封闭1h即可
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4楼2014-04-09 15:13:31
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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230: 金币+2, ★有帮助 2014-04-09 21:04:54
0.05% tween 效果没问题
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5楼2014-04-09 16:54:33
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sunrq516516

金虫 (小有名气)
酪蛋白的免疫印迹啥啥不是很清楚，我们做的WB的话，一抗我们是用1.5%BSA in TBST.没有用过除了牛奶和BSA之外的东西了……
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永峰1230
Permanent head Damage
10楼2014-04-12 14:06:21
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sunrq516516

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-04-12 21:43:25
请问，，你的　　封闭液是　　１。５％　ＢＳＡ吗？　　　　　封闭液　能重复使用吗？...

我们用的是3%的BSA做blocking。重复使用三次左右，但一般我们都用新鲜的……牛奶没重复使用过。
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永峰1230
Permanent head Damage
14楼2014-04-13 09:16:19
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sunrq516516 at 2014-04-09 14:42:52
恩，我们实验室一直用的是0.05% tween 20 in TBS。感觉blocking的时间长点会好一些。有些同事做过4度 blocking overnight，感觉相当不错……

请问，封闭液 ，我的不能用 5%脱脂牛奶， 除了BSA  还能用什么吗？   做的是 针对 酪蛋白的  免疫印迹----------一抗稀释液是不是要和  封闭液 一样呢？谢谢谢谢
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12
6楼2014-04-12 13:48:38
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huiting410 at 2014-04-09 15:13:31
0.05% Tween 20，在PBS中，配成5%的MPBST封闭1h即可

请问，封闭液 ，我的不能用 5%脱脂牛奶， 除了BSA  还能用什么吗？   做的是 针对 酪蛋白的  免疫印迹----------一抗稀释液是不是要和  封闭液 一样呢？谢谢谢谢
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12
7楼2014-04-12 13:48:52
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by weskerZXC at 2014-04-09 13:36:56
我们是千分之一，效果不错

请问，封闭液 ，我的不能用 5%脱脂牛奶， 除了BSA  还能用什么吗？   做的是 针对 酪蛋白的  免疫印迹----------一抗稀释液是不是要和  封闭液 一样呢？谢谢谢谢
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12
8楼2014-04-12 13:48:59
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 意孤城_ at 2014-04-09 16:54:33
0.05% tween 效果没问题

请问，封闭液 ，我的不能用 5%脱脂牛奶， 除了BSA  还能用什么吗？   做的是 针对 酪蛋白的  免疫印迹----------一抗稀释液是不是要和  封闭液 一样呢？谢谢谢谢
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12
9楼2014-04-12 13:49:05
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