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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组蛋白为什么分子量变为原来的3倍了？
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zdwxxw

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白为什么分子量变为原来的3倍了？ 已有5人参与

如题，原来的蛋白表达出来是15kda左右，跟理论值一致，为什么改变了一些密码子之后，表达出来的东西是45kda左右？关键是生物活性跟原来的一样，是不是变成了二聚体或者三聚体了？有木有遇到类似情况的虫友，怎么破？
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踏踏实实做好自己，其他的事与你无关。
1楼 2014-09-28 16:58:38
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langzian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-29 11:17:41
zdwxxw: 金币+5, ★有帮助, 恩呢，我看看 2014-09-29 20:50:43
SDS_PAGE 是不会有二聚体的，除非二硫键，你可以变性电泳试试

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江山
2楼2014-09-28 18:50:34
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-29 11:17:44
zdwxxw: 金币+5, ★有帮助, 恩恩，找找文献看看 2014-09-29 20:51:44
三聚体，一般是这个原因，sds有时不能完全打开四级结构的

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3楼2014-09-28 19:00:07
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ccandcc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-29 11:17:48
zdwxxw: 金币+5, ★有帮助, 哦哦，我试试哈 2014-09-29 20:50:19
进样之前多煮沸一会，我觉得是没完全打开
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4楼2014-09-29 10:22:06
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
估计是你优化密码子的时候搞错了，氨基酸突变成有糖链的了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2014-10-02 00:17:35
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by langzian at 2014-09-28 18:50:34
SDS_PAGE 是不会有二聚体的，除非二硫键，你可以变性电泳试试

SDS-PAGE的时候，仍然会有很多二聚体、三聚体，SDS本身就是变性的，可以再通过加盐酸胍等更强烈的变性剂处理看一下。
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6楼2014-10-03 09:03:50
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-10-02 00:17:35
估计是你优化密码子的时候搞错了，氨基酸突变成有糖链的了。

糖链是不太可能让一个蛋白的分子量变成3倍的， 稍微大一点点就不错了。
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7楼2014-10-03 09:04:29
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zdwxxw(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:08:52
引用回帖:
4楼: Originally posted by ccandcc at 2014-09-29 10:22:06
进样之前多煮沸一会，我觉得是没完全打开

加SDS如果煮10分钟还不能打开，那可能需要加更强的变性剂来处理。
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8楼2014-10-03 09:05:03
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
zdwxxw(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:09:04
引用回帖:
7楼: Originally posted by sadc at 2014-10-03 09:04:29
糖链是不太可能让一个蛋白的分子量变成3倍的， 稍微大一点点就不错了。...

2倍是可以的，我们实验室遇到了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2014-10-03 12:29:58
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
你们发现没有，楼主一直没有再现身，这对充分交流是不利的。
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10楼2014-10-04 22:32:34
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