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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组蛋白为什么分子量变为原来的3倍了？
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zdwxxw

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 重组蛋白为什么分子量变为原来的3倍了？ 已有5人参与

如题，原来的蛋白表达出来是15kda左右，跟理论值一致，为什么改变了一些密码子之后，表达出来的东西是45kda左右？关键是生物活性跟原来的一样，是不是变成了二聚体或者三聚体了？有木有遇到类似情况的虫友，怎么破？
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踏踏实实做好自己，其他的事与你无关。
1楼 2014-09-28 16:58:38
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by langzian at 2014-09-28 18:50:34
SDS_PAGE 是不会有二聚体的，除非二硫键，你可以变性电泳试试

SDS-PAGE的时候，仍然会有很多二聚体、三聚体，SDS本身就是变性的，可以再通过加盐酸胍等更强烈的变性剂处理看一下。
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6楼2014-10-03 09:03:50
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-10-02 00:17:35
估计是你优化密码子的时候搞错了，氨基酸突变成有糖链的了。

糖链是不太可能让一个蛋白的分子量变成3倍的， 稍微大一点点就不错了。
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7楼2014-10-03 09:04:29
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sadc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zdwxxw(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-04 22:08:52
引用回帖:
4楼: Originally posted by ccandcc at 2014-09-29 10:22:06
进样之前多煮沸一会，我觉得是没完全打开

加SDS如果煮10分钟还不能打开，那可能需要加更强的变性剂来处理。
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8楼2014-10-03 09:05:03
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