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shisishese银虫 (小有名气)
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G418筛选转染问题 已有1人参与
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请问一下，最近刚接触转染实验，好多地方不太懂。 G418筛选可以用来稳定转染，那它可以用来做瞬时转染吗？选用G418的目的是？我想把质粒转染细胞，然后接种96孔板进行药物刺激筛选，那么转染是转在培养瓶中，6孔板还是24孔板（据文献报道）比较好？G418是加在转染后的培养瓶（板）中，还是加在96孔板中？请大神赐教！感激不尽 |
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shisishese: 金币+10, ★有帮助, 2 2014-11-03 18:56:21
shisishese: 金币+10, ★有帮助, 2 2014-11-03 18:56:21
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一般我们转染的质粒上会带有抗生素的基因，当质粒转染进入细胞，那么抗性基因就会表达，那么就获得了对抗生素的抵抗能力，G418就是其中常用的一种抗生素。那些没有转染进质粒的细胞就被G418杀死了（事先要摸清楚G418对于你的细胞的致死浓度） 由于转染的质粒大部分在细胞质中，随着传代会失去，那么就失去了对抗生素的抵抗。然而总会有个别质粒可能进入细胞核，然后与染色体同源重组，然后你连续使用G418筛选，这时候细胞就可以永久性获得抗生素的抗性能力，这个时候的细胞就是稳定转染的细胞了 一般情况下，瞬转的细胞不做G418筛选。至于转多大的孔板，我个人觉得完全是按照你种细胞数决定，你要有足够与种96孔板的细胞。 |
2楼2014-11-03 16:02:35
shisishese
银虫 (小有名气)
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3楼2014-12-04 21:00:00
