应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CHO细胞G418筛选浓度的确定
61/1返回列表
查看: 3772  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

水墨蓝

铁虫 (小有名气)

[求助] CHO细胞G418筛选浓度的确定 已有1人参与

看到不少地方说CHO的G418筛选浓度为700-800 μg/ml，确定筛选浓度时需要找出10到14天内杀死细胞的G418浓度，并以高一级的浓度作为筛选浓度，我做这个实验时拉的梯度是500-1200 μg/ml，但是14天过去了，高浓度的孔依然有细胞存活，所以很疑惑是G418浓度不够高吗还是G418本身就不能完完全玩杀死全部的细胞？另外我同时做了另外一个铺板1天半加G418培养的板，细胞存活量明显多于铺板1天的，这是不是意味着G418的作用与细胞浓度有关？大家做的时候有这样的情况出现吗？求大侠们围观解惑！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-16 11:33:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-16 20:50:27
会不会是你细胞浓度太高了，稍微稀释一下吧。或者检查一下药效，做一个对照看看。
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-16 13:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水墨蓝

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-09-16 13:18:01
会不会是你细胞浓度太高了，稍微稀释一下吧。或者检查一下药效，做一个对照看看。

计数后按照200个cell/孔铺的板，做了不加G418的对照，细胞长的非常好，可以看出G418确实有抑制细胞分裂的作用，但是我觉得1200  μg/ml比较高了，但是还是有零零落落的细胞活着。。。
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-16 16:55:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ykluuniu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-16 20:50:38
1.CHO细胞G418筛选的浓度，在分析克隆中肯定是给出了。
2.不同商家的G418，由于纯度不同，药效是有差异的。
3.另外，配制G418母液时，浓度一定配制准确。能否说说你的G418的配制过程？
4.G418筛选时，细胞密度20-30-40％，甚至10％开始杀，绝对不要超过50％。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-09-16 19:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水墨蓝

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ykluuniu at 2013-09-16 19:11:02
1.CHO细胞G418筛选的浓度，在分析克隆中肯定是给出了。
2.不同商家的G418，由于纯度不同，药效是有差异的。
3.另外，配制G418母液时，浓度一定配制准确。能否说说你的G418的配制过程？
4.G418筛选时，细胞密度20 ...

我买的是1 g的包装，预计配的浓度为100 mg/ml，先取4 ml加入G418的包装瓶中，完全溶解后定容至10 ml，这个定容的过程是用1 ml枪进行的，先量取G418溶解后的体积，然后算出应加的HEPES的体积，补齐10 ml。
另外不管铺板1天还是1天半，细胞密度都不会超过30%，但是铺板时间不一样，感觉G418的效果也不同，铺板时间长的细胞存活率大一些
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-17 13:21:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihaizhen

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

确定最佳G418浓度时，才第四天400ug/ml及以上浓度基本都死了，这个死的也太快了点。都撑不到第七天啊，这是怎么回事啊？不是说最佳浓度在700-800左右。还有，请问为啥一定要等到第10-14天？？只有那时才有克隆形成吗
赞一下 回复此楼
6楼2015-12-21 16:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 水墨蓝 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 313求调剂 +5 余摆摆是大哥 2026-04-11 5/250 2026-04-12 10:34 by 猪会飞
[考研] 调剂求收留 +23 果然有我 2026-04-10 24/1200 2026-04-12 10:30 by zhouwenxian
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 生物学调剂 可调剂到生物与医药 +8 李政莹 2026-04-06 9/450 2026-04-11 10:36 by wwj2530616
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 281求调剂 +11 觉得好的吧 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:35 by 逆水乘风
[考研] 346，工科0854求调剂，专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 一志愿京区985，085401电子信息，本科电子信息 +3 阳光开朗的男孩 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:29 by sophia_93
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 292求调剂 +9 笑笑袁 2026-04-09 9/450 2026-04-10 10:05 by LHGeng
[考研] 347材料专硕求调剂 +19 zj8215216 2026-04-06 19/950 2026-04-10 09:36 by 690616278
[考研] 考研调剂-材料类-284 +28 想换手机不想解� 2026-04-08 28/1400 2026-04-09 20:08 by 倒数321?
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 求调剂 +15 熊二想上岸 2026-04-06 15/750 2026-04-08 04:53 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭