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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CHO细胞G418筛选浓度的确定
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水墨蓝

铁虫 (小有名气)

[求助] CHO细胞G418筛选浓度的确定 已有1人参与

看到不少地方说CHO的G418筛选浓度为700-800 μg/ml，确定筛选浓度时需要找出10到14天内杀死细胞的G418浓度，并以高一级的浓度作为筛选浓度，我做这个实验时拉的梯度是500-1200 μg/ml，但是14天过去了，高浓度的孔依然有细胞存活，所以很疑惑是G418浓度不够高吗还是G418本身就不能完完全玩杀死全部的细胞？另外我同时做了另外一个铺板1天半加G418培养的板，细胞存活量明显多于铺板1天的，这是不是意味着G418的作用与细胞浓度有关？大家做的时候有这样的情况出现吗？求大侠们围观解惑！！！
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1楼 2013-09-16 11:33:29
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ykluuniu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-16 20:50:38
1.CHO细胞G418筛选的浓度，在分析克隆中肯定是给出了。
2.不同商家的G418，由于纯度不同，药效是有差异的。
3.另外，配制G418母液时，浓度一定配制准确。能否说说你的G418的配制过程？
4.G418筛选时，细胞密度20-30-40％，甚至10％开始杀，绝对不要超过50％。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-09-16 19:11:02
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-16 20:50:27
会不会是你细胞浓度太高了，稍微稀释一下吧。或者检查一下药效，做一个对照看看。
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2楼2013-09-16 13:18:01
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水墨蓝

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-09-16 13:18:01
会不会是你细胞浓度太高了，稍微稀释一下吧。或者检查一下药效，做一个对照看看。

计数后按照200个cell/孔铺的板，做了不加G418的对照，细胞长的非常好，可以看出G418确实有抑制细胞分裂的作用，但是我觉得1200  μg/ml比较高了，但是还是有零零落落的细胞活着。。。
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3楼2013-09-16 16:55:07
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水墨蓝

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ykluuniu at 2013-09-16 19:11:02
1.CHO细胞G418筛选的浓度，在分析克隆中肯定是给出了。
2.不同商家的G418，由于纯度不同，药效是有差异的。
3.另外，配制G418母液时，浓度一定配制准确。能否说说你的G418的配制过程？
4.G418筛选时，细胞密度20 ...

我买的是1 g的包装，预计配的浓度为100 mg/ml，先取4 ml加入G418的包装瓶中，完全溶解后定容至10 ml，这个定容的过程是用1 ml枪进行的，先量取G418溶解后的体积，然后算出应加的HEPES的体积，补齐10 ml。
另外不管铺板1天还是1天半，细胞密度都不会超过30%，但是铺板时间不一样，感觉G418的效果也不同，铺板时间长的细胞存活率大一些
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5楼2013-09-17 13:21:02
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