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rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] G418 和puromycin共筛选

本人准备同时转染带有neo和puro筛选标记的质粒到细胞中,所以要共筛选,有木有大侠可提供参考资料?同时问一下是293比较好还是CHO比较好?谢谢!
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖! 2012-06-26 08:15:16
细胞对G418+PURO的周期一样么
我记得似乎是G418两周,PURO一周左右。。。
没这样转过,观望中。。。
2楼2012-06-25 20:51:00
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countingcrow

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖! 2012-06-26 08:15:27
首先提醒,293不能用来作G418稳转,因为293本身就是G418稳转出来的,带一个腺病毒E1基因。

本人没有做过两种抗生素的稳转,但是我建议,先压成一种,再压另一种,否则细胞估计会死光光。

至于具体步骤,网上或者文献里查吧。
3楼2012-06-26 06:31:29
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keennes

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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rainontime: 金币+10 2012-09-03 14:44:38
先摸抗生素作用浓度,我两种共转U2OS细胞,puro 2μg/ml;G418,500-1000μg/ml,压细胞克隆成功了。
独上高楼,望尽天涯路……
4楼2012-06-27 00:26:16
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keennes

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-06-25 20:51:00
细胞对G418+PURO的周期一样么
我记得似乎是G418两周,PURO一周左右。。。
没这样转过,观望中。。。

不同的细胞不一样。puro比G418起效快些,有的细胞三四天就可以了。
独上高楼,望尽天涯路……
5楼2012-06-27 00:29:40
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by countingcrow at 2012-06-26 06:31:29
首先提醒,293不能用来作G418稳转,因为293本身就是G418稳转出来的,带一个腺病毒E1基因。

本人没有做过两种抗生素的稳转,但是我建议,先压成一种,再压另一种,否则细胞估计会死光光。

至于具体步骤,网上或 ...

大侠你说的是293T吧。。。。。还是293啊??求验证。
6楼2012-06-27 09:09:18
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by keennes at 2012-06-27 00:26:16
先摸抗生素作用浓度,我两种共转U2OS细胞,puro 2μg/ml;G418,500-1000μg/ml,压细胞克隆成功了。

那后面稳定加压是不是用这些浓度的一半?
7楼2012-06-27 09:12:04
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keennes

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by rainontime at 2012-06-27 09:12:04
那后面稳定加压是不是用这些浓度的一半?...

我是G418维持在500,puro还是2
独上高楼,望尽天涯路……
8楼2012-06-27 12:41:40
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