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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » G418 和puromycin共筛选
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rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] G418 和puromycin共筛选

本人准备同时转染带有neo和puro筛选标记的质粒到细胞中，所以要共筛选，有木有大侠可提供参考资料？同时问一下是293比较好还是CHO比较好？谢谢！
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1楼 2012-06-25 10:43:26
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖！ 2012-06-26 08:15:16
细胞对G418+PURO的周期一样么
我记得似乎是G418两周，PURO一周左右。。。
没这样转过，观望中。。。
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2楼2012-06-25 20:51:00
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countingcrow

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖！ 2012-06-26 08:15:27
首先提醒，293不能用来作G418稳转，因为293本身就是G418稳转出来的，带一个腺病毒E1基因。

本人没有做过两种抗生素的稳转，但是我建议，先压成一种，再压另一种，否则细胞估计会死光光。

至于具体步骤，网上或者文献里查吧。
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3楼2012-06-26 06:31:29
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keennes

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainontime: 金币+10 2012-09-03 14:44:38
先摸抗生素作用浓度，我两种共转U2OS细胞，puro 2μg/ml;G418,500-1000μg/ml，压细胞克隆成功了。
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独上高楼，望尽天涯路……
4楼2012-06-27 00:26:16
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keennes

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-06-25 20:51:00
细胞对G418+PURO的周期一样么
我记得似乎是G418两周，PURO一周左右。。。
没这样转过，观望中。。。

不同的细胞不一样。puro比G418起效快些，有的细胞三四天就可以了。
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独上高楼，望尽天涯路……
5楼2012-06-27 00:29:40
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rainontime

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by countingcrow at 2012-06-26 06:31:29
首先提醒，293不能用来作G418稳转，因为293本身就是G418稳转出来的，带一个腺病毒E1基因。

本人没有做过两种抗生素的稳转，但是我建议，先压成一种，再压另一种，否则细胞估计会死光光。

至于具体步骤，网上或 ...

大侠你说的是293T吧。。。。。还是293啊？？求验证。
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6楼2012-06-27 09:09:18
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rainontime

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by keennes at 2012-06-27 00:26:16
先摸抗生素作用浓度，我两种共转U2OS细胞，puro 2μg/ml;G418,500-1000μg/ml，压细胞克隆成功了。

那后面稳定加压是不是用这些浓度的一半？
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7楼2012-06-27 09:12:04
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keennes

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by rainontime at 2012-06-27 09:12:04
那后面稳定加压是不是用这些浓度的一半？...

我是G418维持在500，puro还是2
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独上高楼，望尽天涯路……
8楼2012-06-27 12:41:40
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