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rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] G418 和puromycin共筛选

本人准备同时转染带有neo和puro筛选标记的质粒到细胞中,所以要共筛选,有木有大侠可提供参考资料?同时问一下是293比较好还是CHO比较好?谢谢!
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by keennes at 2012-06-27 00:26:16
先摸抗生素作用浓度,我两种共转U2OS细胞,puro 2μg/ml;G418,500-1000μg/ml,压细胞克隆成功了。

那后面稳定加压是不是用这些浓度的一半?
7楼2012-06-27 09:12:04
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖! 2012-06-26 08:15:16
细胞对G418+PURO的周期一样么
我记得似乎是G418两周,PURO一周左右。。。
没这样转过,观望中。。。
2楼2012-06-25 20:51:00
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countingcrow

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖! 2012-06-26 08:15:27
首先提醒,293不能用来作G418稳转,因为293本身就是G418稳转出来的,带一个腺病毒E1基因。

本人没有做过两种抗生素的稳转,但是我建议,先压成一种,再压另一种,否则细胞估计会死光光。

至于具体步骤,网上或者文献里查吧。
3楼2012-06-26 06:31:29
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keennes

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
rainontime: 金币+10 2012-09-03 14:44:38
先摸抗生素作用浓度,我两种共转U2OS细胞,puro 2μg/ml;G418,500-1000μg/ml,压细胞克隆成功了。
独上高楼,望尽天涯路……
4楼2012-06-27 00:26:16
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