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nanjizhou91

木虫 (小有名气)

[求助] DGGE微生物多样性,细菌和真菌引物的选择 已有4人参与

我要做土壤微生物多样性的分析,采用DGGE的方法(好多人建议用高通量,但是本项试验只用测定优势菌即可,故选择DGGE),由于是刚开始接触,很多问题不太了解,有以下疑惑:
1.DGGE之后要进行克隆测序,那么细菌和真菌的引物用哪些好?
2.经典引物338F/518R,好多人都说不能用于测序,那么341、907呢?也有人推荐27、1492?这些引物分别代表哪个区?
3.真菌引物用GC-Fung和NS1能有好的测序效果吗?
急用!!!非常感谢各位大神的鼎力相助!
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biolinker

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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nanjizhou91(dllchina代发): 金币+3, good 2014-09-24 10:01:57
nanjizhou91: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-09-24 10:36:43
1、做DGGE原核微生物多样性分析的引物用的比较多的是:338F和518R (V3区)
     真菌的引物做的比较多的是V4区和ITS(具体引物序列可以查找相关文献)
2、“不能用于测序”这句话,我不是很明白你的意思。341F、907R是V3-V5区,27F、1492R是V1-V9区。
3、这些引物没有用过,具体怎样没法告知。

建议:如果你打算采用DGGE分析土壤微生物多样性的话,扩增片段不要过长或者过短。因为DGGE只能对200-700bp的片段有效地分离,过大或者过小的片段分离效果都不是很好。
以上是本人拙见,供你参考。
3楼2014-09-24 09:51:35
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biolinker

金虫 (小有名气)

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引用回帖:
8楼: Originally posted by nanjizhou91 at 2014-09-24 20:15:11
那么V3-V5好做吗?测序结果比V1好吧?...

V3-V5的话,片段比较长,测序比较麻烦。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2014-09-25 11:20:36
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nanjizhou91

木虫 (小有名气)

2楼2014-09-23 17:09:51
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nanjizhou91

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biolinker at 2014-09-24 09:51:35
1、做DGGE原核微生物多样性分析的引物用的比较多的是:338F和518R (V3区)
     真菌的引物做的比较多的是V4区和ITS(具体引物序列可以查找相关文献)
2、“不能用于测序”这句话,我不是很明白你的意思。341F、90 ...

其实是说338  518  扩增的片段太短  用于测序就没多大意义了吧?
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4楼2014-09-24 10:38:11
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nanjizhou91

木虫 (小有名气)

27F、1492R是V1-V9区  这个多用于菌种鉴定吧?
期望与虫虫们交流学术问题
5楼2014-09-24 10:38:58
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金虫 (小有名气)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by nanjizhou91 at 2014-09-24 10:38:11
其实是说338  518  扩增的片段太短  用于测序就没多大意义了吧?...

现在做的最多的还是V3区
6楼2014-09-24 16:36:41
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biolinker

金虫 (小有名气)

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引用回帖:
5楼: Originally posted by nanjizhou91 at 2014-09-24 10:38:58
27F、1492R是V1-V9区  这个多用于菌种鉴定吧?

做V1-V9,相当于做宏基因组了。
7楼2014-09-24 16:38:05
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nanjizhou91

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by biolinker at 2014-09-24 16:36:41
现在做的最多的还是V3区...

那么V3-V5好做吗?测序结果比V1好吧?
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8楼2014-09-24 20:15:11
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nanjizhou91

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by biolinker at 2014-09-25 11:20:36
V3-V5的话,片段比较长,测序比较麻烦。...

谢谢!
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10楼2014-09-25 16:13:05
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