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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)

[求助] HPLC测定样品出现倒峰是什么原因? 已有5人参与

请教各位专家,用HPLC测样品时300nm处谱图正常,为什么在310nm、320nm处出现密密麻麻的倒峰呢?我用的流动相是甲醇-水,样品也是用甲醇溶解的,请专家们帮忙分析原因,谢谢了!
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snmrna

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yulinlin2013 at 2014-09-21 14:09:21
这是310nm下的色谱图,样品是经石油醚回流1h,回收溶剂后用甲醇溶解的,流动相是67%甲醇等度洗脱。320nm下的色谱图跟这个图相似,倒峰也是出现在15~20min之间,另外还有的是倒峰出现在前10min、前14min、20~25min, ...

感觉也有可能是样品中小极性的没什么紫外吸收的化合物引起的,因为它们和参比有些负差,跟你的流动相相比
7楼2014-09-21 21:30:46
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是杂质的影响,很可能是试剂里面带进去的,在其他波长下检测不到,在310nm波长下有强吸收
人生若只如初见...
10楼2014-09-22 10:06:22
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你看看你的紫外检测器的设置。缺省值是用380nm做参比。如果你的混合物在那附近有明显吸收就可能出负峰。

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2014-09-22 12:18:48
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普通回帖

joblee

木虫 (正式写手)

没图啊?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-09-20 17:26:49
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liwentao2010

荣誉版主 (文坛精英)

山涛

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

不明白楼主的意思,请附上图说明,便于虫友们讨论
加油!
3楼2014-09-20 18:47:19
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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by joblee at 2014-09-20 17:26:49
没图啊?

这是310nm下的色谱图,样品是经石油醚回流1h,回收溶剂后用甲醇溶解的,流动相是67%甲醇等度洗脱。320nm下的色谱图跟这个图相似,倒峰也是出现在15~20min之间,另外还有的是倒峰出现在前10min、前14min、20~25min,还有的出现在中间;总之,就是在310nm、320nm下的色谱图有倒峰,220nm、254nm、300nm下的色谱图正常。
另外,这个样品之前也测过,也是在这些波长下,出峰都很正常,不知道现在是什么原因,请大家帮忙分析一下,谢谢!
HPLC测定样品出现倒峰是什么原因?
图片1.png

天道酬勤!
4楼2014-09-21 14:07:42
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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liwentao2010 at 2014-09-20 18:47:19
不明白楼主的意思,请附上图说明,便于虫友们讨论

这是310nm下的色谱图,样品是经石油醚回流1h,回收溶剂后用甲醇溶解的,流动相是67%甲醇等度洗脱。320nm下的色谱图跟这个图相似,倒峰也是出现在15~20min之间,另外还有的是倒峰出现在前10min、前14min、20~25min,还有的出现在中间;总之,就是在310nm、320nm下的色谱图有倒峰,220nm、254nm、300nm下的色谱图正常。
另外,这个样品之前也测过,也是在这些波长下,出峰都很正常,不知道现在是什么原因,请大家帮忙分析一下,谢谢!
HPLC测定样品出现倒峰是什么原因?-1
图片1.png

天道酬勤!
5楼2014-09-21 14:09:21
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liwentao2010

荣誉版主 (文坛精英)

山涛

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★ ★
yulinlin2013(费姚永芬代发): 金币+3 2014-09-21 19:16:07
引用回帖:
5楼: Originally posted by yulinlin2013 at 2014-09-21 14:09:21
这是310nm下的色谱图,样品是经石油醚回流1h,回收溶剂后用甲醇溶解的,流动相是67%甲醇等度洗脱。320nm下的色谱图跟这个图相似,倒峰也是出现在15~20min之间,另外还有的是倒峰出现在前10min、前14min、20~25min, ...

HPLC测试前几分钟基线上出现倒峰,正常,可能杂质与仪器的稳定性有关。其强度很弱,不会干扰测定物质。测试中可能也有倒峰,只是强度很弱,显现不出来。像楼主这么强的倒峰没有见过。建议楼主先用标样测试一下,看看是否有这么强的倒峰,若是有,可能与你的仪器有关。
加油!
6楼2014-09-21 14:18:17
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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by snmrna at 2014-09-21 21:30:46
感觉也有可能是样品中小极性的没什么紫外吸收的化合物引起的,因为它们和参比有些负差,跟你的流动相相比...

哦,谢谢了
天道酬勤!
8楼2014-09-22 07:55:23
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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by liwentao2010 at 2014-09-21 14:18:17
HPLC测试前几分钟基线上出现倒峰,正常,可能杂质与仪器的稳定性有关。其强度很弱,不会干扰测定物质。测试中可能也有倒峰,只是强度很弱,显现不出来。像楼主这么强的倒峰没有见过。建议楼主先用标样测试一下,看 ...

好的,谢谢您的建议!
天道酬勤!
9楼2014-09-22 07:56:37
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