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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC测定样品出现倒峰是什么原因？
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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)

[求助] HPLC测定样品出现倒峰是什么原因？ 已有5人参与

请教各位专家，用HPLC测样品时300nm处谱图正常，为什么在310nm、320nm处出现密密麻麻的倒峰呢？我用的流动相是甲醇-水，样品也是用甲醇溶解的，请专家们帮忙分析原因，谢谢了！
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天道酬勤！
1楼 2014-09-20 16:45:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

snmrna

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yulinlin2013 at 2014-09-21 14:09:21
这是310nm下的色谱图，样品是经石油醚回流1h，回收溶剂后用甲醇溶解的，流动相是67%甲醇等度洗脱。320nm下的色谱图跟这个图相似，倒峰也是出现在15~20min之间，另外还有的是倒峰出现在前10min、前14min、20~25min， ...

感觉也有可能是样品中小极性的没什么紫外吸收的化合物引起的，因为它们和参比有些负差，跟你的流动相相比
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7楼2014-09-21 21:30:46
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是杂质的影响，很可能是试剂里面带进去的，在其他波长下检测不到，在310nm波长下有强吸收
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人生若只如初见...
10楼2014-09-22 10:06:22
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你看看你的紫外检测器的设置。缺省值是用380nm做参比。如果你的混合物在那附近有明显吸收就可能出负峰。

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12楼2014-09-22 12:18:48
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普通回帖

joblee

木虫 (正式写手)
没图啊？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-09-20 17:26:49
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liwentao2010

荣誉版主 (文坛精英)

山涛

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
不明白楼主的意思，请附上图说明，便于虫友们讨论
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加油！
3楼2014-09-20 18:47:19
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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by joblee at 2014-09-20 17:26:49
没图啊？

这是310nm下的色谱图，样品是经石油醚回流1h，回收溶剂后用甲醇溶解的，流动相是67%甲醇等度洗脱。320nm下的色谱图跟这个图相似，倒峰也是出现在15~20min之间，另外还有的是倒峰出现在前10min、前14min、20~25min，还有的出现在中间；总之，就是在310nm、320nm下的色谱图有倒峰，220nm、254nm、300nm下的色谱图正常。
另外，这个样品之前也测过，也是在这些波长下，出峰都很正常，不知道现在是什么原因，请大家帮忙分析一下，谢谢！
HPLC测定样品出现倒峰是什么原因？
图片1.png
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天道酬勤！
4楼2014-09-21 14:07:42
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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liwentao2010 at 2014-09-20 18:47:19
不明白楼主的意思，请附上图说明，便于虫友们讨论

这是310nm下的色谱图，样品是经石油醚回流1h，回收溶剂后用甲醇溶解的，流动相是67%甲醇等度洗脱。320nm下的色谱图跟这个图相似，倒峰也是出现在15~20min之间，另外还有的是倒峰出现在前10min、前14min、20~25min，还有的出现在中间；总之，就是在310nm、320nm下的色谱图有倒峰，220nm、254nm、300nm下的色谱图正常。
另外，这个样品之前也测过，也是在这些波长下，出峰都很正常，不知道现在是什么原因，请大家帮忙分析一下，谢谢！
HPLC测定样品出现倒峰是什么原因？-1
图片1.png
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天道酬勤！
5楼2014-09-21 14:09:21
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liwentao2010

荣誉版主 (文坛精英)

山涛

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
yulinlin2013(费姚永芬代发): 金币+3 2014-09-21 19:16:07
引用回帖:
5楼: Originally posted by yulinlin2013 at 2014-09-21 14:09:21
这是310nm下的色谱图，样品是经石油醚回流1h，回收溶剂后用甲醇溶解的，流动相是67%甲醇等度洗脱。320nm下的色谱图跟这个图相似，倒峰也是出现在15~20min之间，另外还有的是倒峰出现在前10min、前14min、20~25min， ...

HPLC测试前几分钟基线上出现倒峰，正常，可能杂质与仪器的稳定性有关。其强度很弱，不会干扰测定物质。测试中可能也有倒峰，只是强度很弱，显现不出来。像楼主这么强的倒峰没有见过。建议楼主先用标样测试一下，看看是否有这么强的倒峰，若是有，可能与你的仪器有关。
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加油！
6楼2014-09-21 14:18:17
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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by snmrna at 2014-09-21 21:30:46
感觉也有可能是样品中小极性的没什么紫外吸收的化合物引起的，因为它们和参比有些负差，跟你的流动相相比...

哦，谢谢了
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天道酬勤！
8楼2014-09-22 07:55:23
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yulinlin2013

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liwentao2010 at 2014-09-21 14:18:17
HPLC测试前几分钟基线上出现倒峰，正常，可能杂质与仪器的稳定性有关。其强度很弱，不会干扰测定物质。测试中可能也有倒峰，只是强度很弱，显现不出来。像楼主这么强的倒峰没有见过。建议楼主先用标样测试一下，看 ...

好的，谢谢您的建议！
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天道酬勤！
9楼2014-09-22 07:56:37
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