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diguoxueye金虫 (正式写手)
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[交流]
测定CAT活力的问题 已有1人参与
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| 我在测定蔬菜CAT活力时发现，测定的吸光值先下降，后来有一两个点上升，然后接着陡然下降，就是在异常点的前后的数据分别符合吸光值随时间而下降。我测定酶活力之前做过酶的预热。请问有谁知道为什么会有异常值的出现。 |
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2楼2014-09-12 09:28:24
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您好。我采用的测定方法如下： 试剂 0.1mol/L pH 7.5磷酸钠缓冲液；50mmol/L pH 7.5磷酸钠缓冲液; 提取缓冲液（含5mmol/L DTT和5% PVP）：称取5g PVP，用0.1mol/L pH 7.5 磷酸钠缓冲液溶解，定容至100mL，即得到所需提取缓冲液，低温（4℃）储藏备用。 20 mmol/L H2O2溶液：吸取227μL 的30% H2O2溶液，用50mmol/L磷酸钠缓冲液冲洗稀释至100mL，现配现用，低温避光保存。 实验步骤： 酶液制备 称取5.0g果蔬样品，置于研钵中，加入5.0mL提取缓冲液，在冰浴条件下研磨成匀浆，于4℃、4000rpm离心20min，收集上清液，即为酶提取液。低温保存备用。 活性测定 酶促反应体系由2.9 mL 20mmol/L H2O2溶液和100μL酶提取液组成。以蒸馏水为参比空白，在反应15s时开始记录反应体系在波长240mm处吸光值，作为初始值，然后每隔30s记录一次，连续测定，至少获取6个点的数据。 实验结果计算与处理 记录反应体系在波长240nm处的吸光度值，制作OD240值随时间变化曲线，根据曲线的初始线性部分计算每分钟吸光度变化值△OD240 〖∆OD〗_240=(OD_240F-OD_240I)/(t_F-t_I) 式中 △OD240 —每分钟反应混合物吸光度值变化值； △OD240F —反应混合液吸光度终止值； △OD240I —反应混合液吸光值初始值； tF —反应终止时间，min； tI —反应初始时间。 以每克蔬菜样品每分钟吸光值变化值减少0.01为1个过氧化氢酶活性单位，单位是0.01△OD240/(min*g)。计算公式： U=〖∆OD〗_240*V/(0.01*V_s*m) 式中 V——样品提取液总体积，mL； Vs——测定时所取样品提取液体积，mL； M——样品质量，m。 |
3楼2014-09-24 20:26:54
