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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 如何让组氨酸标签蛋白挂上镍柱？
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1020490511

银虫 (小有名气)

[求助] 如何让组氨酸标签蛋白挂上镍柱？ 已有2人参与

最近纯化蛋白遇到瓶颈，为得到好的纯化效果，便做上游改造，在蛋白n端加上六个组氨酸标签。诱导表达测序都已成功，但挂不上镍柱。请大神给解指路。

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1楼 2014-09-09 12:35:38
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1020490511: 金币+2 2014-09-09 14:23:56
做个batch试试结合效果以及小样测试纯化条件

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操蛋的XX
2楼2014-09-09 14:11:13
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1020490511

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-09-09 14:11:13
做个batch试试结合效果以及小样测试纯化条件

能具体说一下步骤吗？没做过这个。谢谢！
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3楼2014-09-09 14:24:04
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for5

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1020490511 at 2014-09-09 14:24:04
能具体说一下步骤吗？没做过这个。谢谢！...

就是用树脂在ep管中做

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操蛋的XX
4楼2014-09-09 15:07:57
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weebug

版主 (著名写手)
你用的是什么缓冲液？
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天蓝蓝兮日头晒
5楼2014-09-10 12:03:04
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1020490511

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2014-09-10 12:03:04
你用的是什么缓冲液？

A液 pb20mM,PH7.4，0.15M nacl。B液pb20mM,PH7.4，0.15M nacl，0.5M咪唑。

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6楼2014-09-10 12:23:55
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weebug

版主 (著名写手)
看这帖子有你所需的贴士： http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=6220263
有些人做了梯度咪唑，测试那一个浓度最佳。
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天蓝蓝兮日头晒
7楼2014-09-11 16:45:21
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xuejia174

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2014-09-12 15:39:44
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1020490511

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xuejia174 at 2014-09-12 15:39:44
建议换一下PH，这个也挺重要的

等电点是6.4。应如何调ph?ph对挂镍柱有什么影响？

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9楼2014-09-13 12:37:36
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scqing

捐助贵宾 (小有名气)

emuch: 屏蔽内容, 违规存档 2014-09-23 11:05:10
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

1020490511
10楼2014-09-22 12:09:54
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