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angelagirls金虫 (正式写手)
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SDS-PAGE 遇到问题 已有3人参与
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跑了好多天的电泳 让人要疯了的赶脚 我的marker是1.2-4.5的 分离胶15% 浓缩胶3% 蛋白浓度1mg/mL 跑电泳时 溴酚蓝颜色特别浅 基本上很难看到 mark只能跑出来三条 最后脱色完 样品基本上木有条带 雁过无痕啊 甚是伤心 求指教  |
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robertno
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2楼2014-09-05 21:54:08
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6楼2014-09-16 19:23:57
7楼2014-09-17 09:31:56
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一： Tricine-SDS-PAGE是一种适用分离鉴定小分子量蛋白的电泳方案。常见有两种：一是由16%分离胶，10%间隙胶，4%浓缩胶；二是16%分离胶，4%浓缩胶。 二：溶液配制 阳极缓冲液：0.2M Tris-HCl. pH8.9(准确调) 阴极缓冲液：0.1M Tris-HCl，0.1M Tricine, 0.1%（m/v）SDS，pH8.25（不需要调很多） 凝胶缓冲液：3M Tris-HCl, 0.3%(m/v)SDS,pH8.45（pH需要准确调） 30%丙烯酰胺：29.0g丙烯酰胺，1.0g甲叉双丙烯酰胺，定容到100ml。 三：配胶配方 16%分离胶 10%间隙胶 4%浓缩胶 凝胶缓冲液 2.0ml 1.34ml 0.75ml 30%丙烯酰胺 4.26ml 1.67ml 0.42ml 尿素 2.16g — — 水 1.5ml 2ml 1.9ml 10%APS 100 μl 30 μl 50 μl TEMED 10 μl 3 μl 5 μl 胶层高度比例：3cm—2cm—2cm 四：配置事项： A: 分离胶和间隙胶同时加入胶板：分离胶加入3厘米，然后加入间隙胶2厘米 。最后加入20%乙醇液封； B: 胶凝后，加入浓缩胶； C: 样品的处理：对样品的pH要求比较严格，确保样品的PH在8.45左右； D: 样品的上样量不能过大； E：电泳槽内槽为阴极，外液阳极。注意不要漏液，是内外液相通。 |
8楼2014-09-17 09:36:22
【答案】应助回帖
★ ★ ★
angelagirls: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-09-19 09:02:12
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一： Tricine-SDS-PAGE是一种适用分离鉴定小分子量蛋白的电泳方案。常见有两种：一是由16%分离胶，10%间隙胶，4%浓缩胶；二是16%分离胶，4%浓缩胶。 二：溶液配制 阳极缓冲液：0.2M Tris-HCl. pH8.9(准确调) 阴极缓冲液：0.1M Tris-HCl，0.1M Tricine, 0.1%（m/v）SDS，pH8.25（不需要调很多） 凝胶缓冲液：3M Tris-HCl, 0.3%(m/v)SDS,pH8.45（pH需要准确调） 30%丙烯酰胺：29.0g丙烯酰胺，1.0g甲叉双丙烯酰胺，定容到100ml。 三：配胶配方 16%分离胶 10%间隙胶 4%浓缩胶 凝胶缓冲液 2.0ml 1.34ml 0.75ml 30%丙烯酰胺 4.26ml 1.67ml 0.42ml 尿素 2.16g — — 水 1.5ml 2ml 1.9ml 10%APS 100 μl 30 μl 50 μl TEMED 10 μl 3 μl 5 μl 胶层高度比例：3cm—2cm—2cm 四：配置事项： A: 分离胶和间隙胶同时加入胶板：分离胶加入3厘米，然后加入间隙胶2厘米 。最后加入20%乙醇液封； B: 胶凝后，加入浓缩胶； C: 样品的处理：对样品的pH要求比较严格，确保样品的PH在8.45左右； D: 样品的上样量不能过大； E：电泳槽内槽为阴极，外液阳极。注意不要漏液，是内外液相通。 |
9楼2014-09-17 09:38:00
jurkat.1640
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