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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » ELISA检测蛋白相互作用。
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dwhhzhang

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] ELISA检测蛋白相互作用。

各位大侠，救命啊。鄙人用ELISA检测蛋白质相互作用，就是测不出来。我的protocol如下：
1  Coat the microplate with the first protein at 37℃ for 3 h ;

2  Block the plate with 3% BSA at 37℃ for 2 h;

3  The second protein with  GST-tag was added to each well, incubated for 2 h at  37℃, then wash twice with PBS ;

4  Add  anti-GST Biotin conjugated (diluted 1:1000) in PBS-0.05% Tween-20, and incubated at 37℃ for 1 h, and then washed three times in PBS-0.05% Tween-20;

5   Add Streptavidin conjugated Alkaline Phosphatase in PBS-0.05% Tween-20,and incubated at 37℃ for 1 h, and then washed three times in PBS-0.05% Tween-20;

6   The color reaction was developed with p-NPP.

7  Stop the reaction and teh absorbance was read by a microplate reader at 405nm.
似乎蛋白之间的相互作用很弱，经不起折腾，有哪位大侠有成功经验或好的建议，帮帮我吧。另外，我现在只能用ELISA，其他方法条件不具备。

跪谢了！
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1楼 2014-09-03 15:30:11
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2012chen

新虫 (职业作家)
我做过 有的蛋白包被空间结构有改变 亲和力就低

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为学之道，存乎一心！
2楼2018-10-19 14:47:58
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2012chen

新虫 (职业作家)
你可以用 Pulldown或者 FP试试 能测出来。。

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为学之道，存乎一心！
3楼2018-10-19 14:48:23
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