应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » ELISA检测蛋白相互作用。
31/1返回列表
查看: 2303  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dwhhzhang

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] ELISA检测蛋白相互作用。

各位大侠，救命啊。鄙人用ELISA检测蛋白质相互作用，就是测不出来。我的protocol如下：
1  Coat the microplate with the first protein at 37℃ for 3 h ;

2  Block the plate with 3% BSA at 37℃ for 2 h;

3  The second protein with  GST-tag was added to each well, incubated for 2 h at  37℃, then wash twice with PBS ;

4  Add  anti-GST Biotin conjugated (diluted 1:1000) in PBS-0.05% Tween-20, and incubated at 37℃ for 1 h, and then washed three times in PBS-0.05% Tween-20;

5   Add Streptavidin conjugated Alkaline Phosphatase in PBS-0.05% Tween-20,and incubated at 37℃ for 1 h, and then washed three times in PBS-0.05% Tween-20;

6   The color reaction was developed with p-NPP.

7  Stop the reaction and teh absorbance was read by a microplate reader at 405nm.
似乎蛋白之间的相互作用很弱，经不起折腾，有哪位大侠有成功经验或好的建议，帮帮我吧。另外，我现在只能用ELISA，其他方法条件不具备。

跪谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-03 15:30:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2012chen

新虫 (职业作家)
我做过 有的蛋白包被空间结构有改变 亲和力就低

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
为学之道，存乎一心！
2楼2018-10-19 14:47:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2012chen

新虫 (职业作家)
你可以用 Pulldown或者 FP试试 能测出来。。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
为学之道，存乎一心！
3楼2018-10-19 14:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dwhhzhang 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭