24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2591  |  回复: 41

wxy3937

金虫 (正式写手)

[交流] ELISA试验不显色,希望得到大家帮助 已有2人参与

1) 样品为鱼肝micorsome,100ul加入ELISA板,每个样品三次重复。
2) 湿盒中,4度冰箱过夜。
3) 200ul 低盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
4) 5%脱脂奶粉封闭1小时
5) 200ul 低盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
6) 100ul 一抗,室温1.5小时
7) 200ul高盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
8) 100ul 二抗,室温1.5小时
9) 200ul高盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
10) 100ul TMB/OPD显色 30分钟
11) 1N 硫酸终止反应
TMB和OPD都已经试过了,均不显色,我猜测我试验的问题是蛋白没有煮过。希望大家帮我一下,谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张易120

木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wxy3937: 金币+8, 谢谢你 2014-09-01 21:30:15
本科学渣表示一年前做的Elisa,现在忘得差不多了。有几个疑问,样本提取多少时间了?我前一天提取的样本同样没煮但第二天染出来了。另外样本是否-70度保存?是否因保存不善分解?Elisa盒子不是里边已经加了一抗吗?另外楼主的室温是37度吗?建议楼主严格按照盒子带的说明书操作。(希望楼主多多指教,勿喷)

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-09-01 19:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wxy3937: 金币+8, 谢谢你 2014-09-01 21:30:35
你先把试剂盒的说明书贴上来看看。
3楼2014-09-01 19:32:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张易120

木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同时好奇标准蛋白染出来没?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-09-01 19:55:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy3937

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-01 18:55:34
同时好奇标准蛋白染出来没?

也没有。我没包被上吗,还是我洗的时候洗掉了?
5楼2014-09-01 20:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy3937

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-09-01 18:32:39
你先把试剂盒的说明书贴上来看看。

没有用试剂盒
6楼2014-09-01 20:13:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张易120

木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-01 20:11:46
也没有。我没包被上吗,还是我洗的时候洗掉了?...

标准蛋白没染出来,如果不是盒子有问题就是操作有问题。洗是洗不掉的,盒子有没有失效?我仔细找了,当时没拍下说明书的照片,我记得当时全程是在37℃摇床上进行的,一天搞定96孔板的,建议楼主找到说明书,严格按说明书操作

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-09-01 20:20:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy3937

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-01 18:12:56
本科学渣表示一年前做的Elisa,现在忘得差不多了。有几个疑问,样本提取多少时间了?我前一天提取的样本同样没煮但第二天染出来了。另外样本是否-70度保存?是否因保存不善分解?Elisa盒子不是里边已经加了一抗吗? ...

样品已经有20天了,保存在-20度,关于降解这个问题,我前段时间做western blot 条带很好;室温达不到37度。你们现在都用试剂盒吗?我做得是鱼的Cytochrome P450,一抗是自己做的鼠抗鱼单抗,不知道有没有特异性抗体的试剂盒。
8楼2014-09-01 20:28:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy3937

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-01 19:20:48
标准蛋白没染出来,如果不是盒子有问题就是操作有问题。洗是洗不掉的,盒子有没有失效?我仔细找了,当时没拍下说明书的照片,我记得当时全程是在37℃摇床上进行的,一天搞定96孔板的,建议楼主找到说明书,严格按 ...

我的标准蛋白可能充其量算internal positive吧,不是买的公司的。
9楼2014-09-01 20:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张易120

木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-01 20:28:28
样品已经有20天了,保存在-20度,关于降解这个问题,我前段时间做western blot 条带很好;室温达不到37度。你们现在都用试剂盒吗?我做得是鱼的Cytochrome P450,一抗是自己做的鼠抗鱼单抗,不知道有没有特异性抗体 ...

怀疑是试剂盒和抗体的问题,经费充足的话你可以考虑订做。我当初做的是老师买来的,,好像一千左右,测了IL-1β和IL-6.

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2014-09-01 20:35:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wxy3937 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +12 c297914 2026-03-28 12/600 2026-03-29 16:21 by Serene1974
[考研] 南京大学化学调剂 +6 景随风 2026-03-29 9/450 2026-03-29 15:27 by 唐沐儿
[考研] 070300化学354求调剂 +6 101次希望 2026-03-28 6/300 2026-03-29 12:57 by 无际的草原
[考研] 085600,专业课化工原理,321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-24 5/250 2026-03-29 08:55 by qingfeng258
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业,初试351分,复试被刷求调剂! +3 真名有冰 2026-03-29 4/200 2026-03-29 08:47 by qingfeng258
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分,求调剂 +5 0857求调剂. 2026-03-24 6/300 2026-03-28 22:04 by zhq0425
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-27 5/250 2026-03-28 14:25 by 唐沐儿
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 085404求调剂,总分309,本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 086502化学工程342求调剂 +6 阿姨复古不过 2026-03-27 6/300 2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分,前三科223分 +5 dongfang59 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:53 by wxiongid
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 机械学硕总分317求调剂!!!! +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 求调剂 +6 研研,接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
信息提示
请填处理意见