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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA试验不显色，希望得到大家帮助
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张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
28楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-03 21:58:44
1) 昨天4度冰箱包埋的，拿出来之后室温平衡了15分钟，之前的实验均未平衡
2) 加缓冲液洗涤的时候轻一点，猜测是不是缓冲液打的太快会冲掉一部分蛋白
3) 同时做了变性和未变性蛋白，未变性的效果好
还有一个问题 ...

其实我做的盒子里A液和B 液都是现成的，不用自己配

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31楼2014-09-03 22:13:33
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
31楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-03 21:13:33
其实我做的盒子里A液和B 液都是现成的，不用自己配
...

请问你有没有做过酶活和酶抑制试验，方便的话教教我。
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32楼2014-09-03 22:46:07
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张易120

木虫 (职业作家)
引用回帖:
32楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-03 22:46:07
请问你有没有做过酶活和酶抑制试验，方便的话教教我。...

木有……

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33楼2014-09-04 06:31:58
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
帮顶 ~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
34楼2014-09-04 06:52:50
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zq19881029

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wxy3937: 金币+8, 谢谢你。 2014-09-04 16:01:04
你有没有先用碳酸盐缓冲液把蛋白包被在酶标板上啊？还有洗涤的时候貌似是不需要晃动的，静置放几分钟就可以了，一抗二抗的孵育应该在37度培养箱半个小时就足够了啊，TMB显色时间在10分钟以内。以上是我个人的小建议啊，祝你成功。
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35楼2014-09-04 15:18:37
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
35楼: Originally posted by zq19881029 at 2014-09-04 14:18:37
你有没有先用碳酸盐缓冲液把蛋白包被在酶标板上啊？还有洗涤的时候貌似是不需要晃动的，静置放几分钟就可以了，一抗二抗的孵育应该在37度培养箱半个小时就足够了啊，TMB显色时间在10分钟以内。以上是我个人的小建议 ...

谢谢你。
我之前晃得幅度有点大，因为担心洗不干净
TMB确实在10分钟之内褪掉了
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36楼2014-09-04 16:00:42
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留小保

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wxy3937: 金币+5 2014-09-10 13:12:00
你最好看一下说明书，是在室温下1.5个小时吗，会不会是实验室温度低，最好还是在37度吧
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人生若只如初见 何事秋风悲画扇
37楼2014-09-04 17:39:59
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wxy3937: 金币+6 2014-09-10 13:12:44
抗体不是可以用于任何实验的，是否能用于ELISA是需要摸索的。不知LZ在制备单抗的时候，是用什么方法验证抗体的，ELISA？免疫荧光？流式？……有没有做过与天然蛋白的反应？在抗体没有问题的情况，再考虑实验方案。
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38楼2014-09-05 15:30:20
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
37楼: Originally posted by 留小保 at 2014-09-04 16:39:59
你最好看一下说明书，是在室温下1.5个小时吗，会不会是实验室温度低，最好还是在37度吧

嗯，谢谢。今天试试37度看
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39楼2014-09-10 13:11:55
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
38楼: Originally posted by berniehuang at 2014-09-05 14:30:20
抗体不是可以用于任何实验的，是否能用于ELISA是需要摸索的。不知LZ在制备单抗的时候，是用什么方法验证抗体的，ELISA？免疫荧光？流式？……有没有做过与天然蛋白的反应？在抗体没有问题的情况，再考虑实验方案。

谢谢你的建议。
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40楼2014-09-10 13:12:37
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