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wxy3937

金虫 (正式写手)

[交流] ELISA试验不显色,希望得到大家帮助 已有2人参与

1) 样品为鱼肝micorsome,100ul加入ELISA板,每个样品三次重复。
2) 湿盒中,4度冰箱过夜。
3) 200ul 低盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
4) 5%脱脂奶粉封闭1小时
5) 200ul 低盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
6) 100ul 一抗,室温1.5小时
7) 200ul高盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
8) 100ul 二抗,室温1.5小时
9) 200ul高盐缓冲液洗涤,轻微晃动洗3次每次5分钟
10) 100ul TMB/OPD显色 30分钟
11) 1N 硫酸终止反应
TMB和OPD都已经试过了,均不显色,我猜测我试验的问题是蛋白没有煮过。希望大家帮我一下,谢谢。
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wxy3937

金虫 (正式写手)

引用回帖:
27楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-03 20:01:04
改变什么后染出来的,求教

1) 昨天4度冰箱包埋的,拿出来之后室温平衡了15分钟,之前的实验均未平衡
2) 加缓冲液洗涤的时候轻一点,猜测是不是缓冲液打的太快会冲掉一部分蛋白
3) 同时做了变性和未变性蛋白,未变性的效果好
还有一个问题不清楚,做了TMB和OPD,但是TMB很快蓝绿色就褪去了,不是大概15-30分钟吗,是H2O2加多了吗?你们TMB的配方是什么?
28楼2014-09-03 21:58:44
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张易120

木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wxy3937: 金币+8, 谢谢你 2014-09-01 21:30:15
本科学渣表示一年前做的Elisa,现在忘得差不多了。有几个疑问,样本提取多少时间了?我前一天提取的样本同样没煮但第二天染出来了。另外样本是否-70度保存?是否因保存不善分解?Elisa盒子不是里边已经加了一抗吗?另外楼主的室温是37度吗?建议楼主严格按照盒子带的说明书操作。(希望楼主多多指教,勿喷)

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-09-01 19:12:56
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wxy3937: 金币+8, 谢谢你 2014-09-01 21:30:35
你先把试剂盒的说明书贴上来看看。
3楼2014-09-01 19:32:39
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张易120

木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同时好奇标准蛋白染出来没?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-09-01 19:55:34
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