应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA试验不显色，希望得到大家帮助
423/5返回列表上一页12345下一页
查看: 2828  |  回复: 41
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wangliang6122
★ ★ ★ ★ ★
wxy3937: 金币+5, 谢谢支持 2014-09-04 10:42:39
祝福祝福
21楼2014-09-02 08:46:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy3937

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-09-02 07:03:47
可能问题：
1. 你制单抗时是用的什么抗原制备的？如果是变性蛋白，那么你做ELISA的样品必须要煮，否则不显色。
2. 高盐缓冲液洗板可能影响显色，用通用的洗涤缓冲液PBST就可以了。
3. 应该用双抗夹心来检测你样 ...

我查了一下，介绍了什么是蛋白变性，但是还是不懂什么是变性蛋白，请您帮忙解释一下。
谢谢，按照你的建议试试煮过并换洗涤缓冲液。
赞一下 回复此楼
22楼2014-09-02 08:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-09-02 07:03:47
可能问题：
1. 你制单抗时是用的什么抗原制备的？如果是变性蛋白，那么你做ELISA的样品必须要煮，否则不显色。
2. 高盐缓冲液洗板可能影响显色，用通用的洗涤缓冲液PBST就可以了。
3. 应该用双抗夹心来检测你样 ...

懂你的意思了，制备的时候是变性过的。谢谢
赞一下 回复此楼
23楼2014-09-02 10:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-01 18:12:56
本科学渣表示一年前做的Elisa，现在忘得差不多了。有几个疑问，样本提取多少时间了？我前一天提取的样本同样没煮但第二天染出来了。另外样本是否-70度保存？是否因保存不善分解？Elisa盒子不是里边已经加了一抗吗？ ...

今天做了有结果，显色是用的OPD，但是有一点我不清楚，为什么颜色跟加入的样品浓度负相关？
赞一下 回复此楼
24楼2014-09-03 17:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-09-01 18:32:39
你先把试剂盒的说明书贴上来看看。

今天做了有结果，显色是用的OPD，但是有一点我不清楚，为什么颜色跟加入的样品浓度负相关？
赞一下 回复此楼
25楼2014-09-03 17:33:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
24楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-03 17:33:36
今天做了有结果，显色是用的OPD，但是有一点我不清楚，为什么颜色跟加入的样品浓度负相关？...

不懂，OD 值怎么会和浓度负相关？不会是你把标准蛋白的顺序记错了吧

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
26楼2014-09-03 18:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
改变什么后染出来的，求教

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
27楼2014-09-03 21:01:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-03 20:01:04
改变什么后染出来的，求教

1) 昨天4度冰箱包埋的，拿出来之后室温平衡了15分钟，之前的实验均未平衡
2) 加缓冲液洗涤的时候轻一点，猜测是不是缓冲液打的太快会冲掉一部分蛋白
3) 同时做了变性和未变性蛋白，未变性的效果好
还有一个问题不清楚，做了ＴＭＢ和ＯＰＤ，但是ＴＭＢ很快蓝绿色就褪去了，不是大概１５－３０分钟吗，是Ｈ２Ｏ２加多了吗？你们ＴＭＢ的配方是什么？
赞一下 回复此楼
28楼2014-09-03 21:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
28楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-03 21:58:44
1) 昨天4度冰箱包埋的，拿出来之后室温平衡了15分钟，之前的实验均未平衡
2) 加缓冲液洗涤的时候轻一点，猜测是不是缓冲液打的太快会冲掉一部分蛋白
3) 同时做了变性和未变性蛋白，未变性的效果好
还有一个问题 ...

配方一：
底物显色A液：醋酸钠13.6g ,柠檬酸1.6g,30%双氧水0.3ml,蒸馏水加至500ml.
底物显色B液 :乙二胺四乙酸二钠0.2g,柠檬酸0.95g,甘油 50ml,取0.15g TMB溶于3mlDMSO中,蒸馏水加至500ml.

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
29楼2014-09-03 22:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张易120

木虫 (职业作家)
引用回帖:
22楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-02 08:57:53
我查了一下，介绍了什么是蛋白变性，但是还是不懂什么是变性蛋白，请您帮忙解释一下。
谢谢，按照你的建议试试煮过并换洗涤缓冲液。...

可能是温度的原因的，一般40分钟左右开始褪色的

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
30楼2014-09-03 22:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wxy3937 的主题更新
423/5返回列表上一页12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 6/300 2026-08-01 15:46 by y4XuShGyllvT
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 11/550 2026-08-01 15:43 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 小木虫看见有人已经知道结果了 +17 1234567wang 2026-07-25 22/1100 2026-08-01 15:43 by iaeyuan
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 8/400 2026-08-01 15:42 by y4XuShGyllvT
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 11/550 2026-08-01 15:40 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +16 低垂的野花 2026-07-31 21/1050 2026-08-01 15:35 by jklily
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 19/950 2026-08-01 15:18 by 40862026
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 18/900 2026-07-31 18:35 by lzchaihuo
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 8/400 2026-07-31 18:13 by beefly
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了？ +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么？ 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭