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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA试验不显色，希望得到大家帮助
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wangliang6122
★ ★ ★ ★ ★
wxy3937: 金币+5, 谢谢支持 2014-09-04 10:42:39
祝福祝福
21楼2014-09-02 08:46:48
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wxy3937

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-09-02 07:03:47
可能问题：
1. 你制单抗时是用的什么抗原制备的？如果是变性蛋白，那么你做ELISA的样品必须要煮，否则不显色。
2. 高盐缓冲液洗板可能影响显色，用通用的洗涤缓冲液PBST就可以了。
3. 应该用双抗夹心来检测你样 ...

我查了一下，介绍了什么是蛋白变性，但是还是不懂什么是变性蛋白，请您帮忙解释一下。
谢谢，按照你的建议试试煮过并换洗涤缓冲液。
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22楼2014-09-02 08:57:53
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-09-02 07:03:47
可能问题：
1. 你制单抗时是用的什么抗原制备的？如果是变性蛋白，那么你做ELISA的样品必须要煮，否则不显色。
2. 高盐缓冲液洗板可能影响显色，用通用的洗涤缓冲液PBST就可以了。
3. 应该用双抗夹心来检测你样 ...

懂你的意思了，制备的时候是变性过的。谢谢
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23楼2014-09-02 10:28:55
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-01 18:12:56
本科学渣表示一年前做的Elisa，现在忘得差不多了。有几个疑问，样本提取多少时间了？我前一天提取的样本同样没煮但第二天染出来了。另外样本是否-70度保存？是否因保存不善分解？Elisa盒子不是里边已经加了一抗吗？ ...

今天做了有结果，显色是用的OPD，但是有一点我不清楚，为什么颜色跟加入的样品浓度负相关？
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24楼2014-09-03 17:33:36
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-09-01 18:32:39
你先把试剂盒的说明书贴上来看看。

今天做了有结果，显色是用的OPD，但是有一点我不清楚，为什么颜色跟加入的样品浓度负相关？
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25楼2014-09-03 17:33:48
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张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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24楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-03 17:33:36
今天做了有结果，显色是用的OPD，但是有一点我不清楚，为什么颜色跟加入的样品浓度负相关？...

不懂，OD 值怎么会和浓度负相关？不会是你把标准蛋白的顺序记错了吧

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26楼2014-09-03 18:05:00
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张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
改变什么后染出来的，求教

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27楼2014-09-03 21:01:04
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wxy3937

金虫 (正式写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 张易120 at 2014-09-03 20:01:04
改变什么后染出来的，求教

1) 昨天4度冰箱包埋的，拿出来之后室温平衡了15分钟，之前的实验均未平衡
2) 加缓冲液洗涤的时候轻一点，猜测是不是缓冲液打的太快会冲掉一部分蛋白
3) 同时做了变性和未变性蛋白，未变性的效果好
还有一个问题不清楚，做了ＴＭＢ和ＯＰＤ，但是ＴＭＢ很快蓝绿色就褪去了，不是大概１５－３０分钟吗，是Ｈ２Ｏ２加多了吗？你们ＴＭＢ的配方是什么？
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28楼2014-09-03 21:58:44
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张易120

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
28楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-03 21:58:44
1) 昨天4度冰箱包埋的，拿出来之后室温平衡了15分钟，之前的实验均未平衡
2) 加缓冲液洗涤的时候轻一点，猜测是不是缓冲液打的太快会冲掉一部分蛋白
3) 同时做了变性和未变性蛋白，未变性的效果好
还有一个问题 ...

配方一：
底物显色A液：醋酸钠13.6g ,柠檬酸1.6g,30%双氧水0.3ml,蒸馏水加至500ml.
底物显色B液 :乙二胺四乙酸二钠0.2g,柠檬酸0.95g,甘油 50ml,取0.15g TMB溶于3mlDMSO中,蒸馏水加至500ml.

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29楼2014-09-03 22:09:37
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张易120

木虫 (职业作家)
引用回帖:
22楼: Originally posted by wxy3937 at 2014-09-02 08:57:53
我查了一下，介绍了什么是蛋白变性，但是还是不懂什么是变性蛋白，请您帮忙解释一下。
谢谢，按照你的建议试试煮过并换洗涤缓冲液。...

可能是温度的原因的，一般40分钟左右开始褪色的

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30楼2014-09-03 22:10:32
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